| 查看: 1662 | 回复: 8 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[求助]
关于荧光定量的问题
|
|||
|
我做的是用荧光定量来分析土壤微生物的群落的大小的，我是用sybr green染料的我刚接触荧光定量，有几个不明白的问题还请大家帮帮忙？ 1 我如何确定我是应该用相对定量还是绝对定量来做呢，我要用质粒来做标准曲线这个能说明我该用什么定量吗 2管家基因，目的基因和参比基因都是用来干什么的，能具体讲一下吗？ 3什么情况下需要做标准曲线，还是都需要做 4 我是提的土壤DNA，我需要用常规的PCR先摸一下条件再做荧光定量吗、各种不懂啊 5我现在对荧光定量PCR的了解只是一段段的感觉连不起来，不能系统的知道，整个具体步骤应该怎么做，请大家帮帮忙啊，查的文献对于我这个初学者有点看不懂。 |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有289人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- ChiP后的荧光定量出现问题，紧急求助。。。。标题要长。。。。
已经有4人回复
- 荧光定量sybrgreen染料荧光值大小的问题
已经有8人回复
- 有关荧光定量的问题！
已经有7人回复
- 荧光定量曲线问题
已经有5人回复
- 求高手解救荧光定量的问题
已经有6人回复
- 荧光定量问题
已经有4人回复
- 选择荧光定量试剂的问题
已经有4人回复
- 【求助/交流】关于荧光定量PCR的一个问题
已经有3人回复
- 【求助/交流】求助，关于荧光定量PCR问题
已经有5人回复
- 【求助/交流】关于做荧光定量pcr的模板问题
已经有12人回复
- 【求助/交流】关于荧光定量PCR中cdna合成的问题
已经有12人回复
- 【求助/交流】实时荧光定量pcr的问题
已经有7人回复
chenguestc
木虫 (职业作家)
- MolEPI: 7
- 应助: 576 (博士)
- 贵宾: 0.4
- 金币: 4526.9
- 散金: 1639
- 红花: 176
- 帖子: 4708
- 在线: 353.5小时
- 虫号: 1337860
- 注册: 2011-07-05
- 性别: GG
- 专业: 作物分子育种
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+4, 鼓励发帖交流问题。 2012-10-03 19:47:24
jerryzyy: 金币+20, ★★★很有帮助 2012-10-04 09:55:43
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+4, 鼓励发帖交流问题。 2012-10-03 19:47:24
jerryzyy: 金币+20, ★★★很有帮助 2012-10-04 09:55:43
1 我如何确定我是应该用相对定量还是绝对定量来做呢，我要用质粒来做标准曲线这个能说明我该用什么定量吗 绝对定量把，用QPCR作相对定量那还不如用普通RTPCR了嘛哈。标准曲线在第三个问题里说。2管家基因，目的基因和参比基因都是用来干什么的，能具体讲一下吗？ 目的基因没有什么好说的，当然就是看你目的基因的表达量了啊。管家基因和参比基因是一回事（就是在不同生物的不同发育阶段其表达量基本一致，可以用来作为参照），是用来标准化你的目的基因的，楼主可以在GOOGLE里搜有一下NORMALISE, QPCR，应该有说明。3什么情况下需要做标准曲线，还是都需要做 做绝对定量都需要，否则如何确定其绝对量呢，用质粒稀释成不同倍数作为模板，用你设计的特异引物来做即可。此外，你可以下载一个STEPONE SOFTWARE，里面有一些帮助说明，你可以仔细阅读一下。4 我是提的土壤DNA，我需要用常规的PCR先摸一下条件再做荧光定量吗、各种不懂啊 是的，在做QPCR之前，是要用普通PCR摸索一下引物条件，一般是指大体退火温度。因为QPCR和普通PCR的BUFFER并不一致，因此，普通PCR结果只是给QPCR提供一个退火温度的参考。普通PCR退火温度摸索好后（例如60度为最适温度），做QPCR，就在60左右几度来做几个温度，找最好的条件就行了。5我现在对荧光定量PCR的了解只是一段段的感觉连不起来，不能系统的知道，整个具体步骤应该怎么做，请大家帮帮忙啊，查的文献对于我这个初学者有点看不懂。 多看一点别人的有关QPCR的帖子，在实践中摸索可以，有不懂就随时到小木虫发问即可。 |
3楼2012-10-03 12:47:47
2楼2012-10-03 10:48:08
4楼2012-10-03 21:47:39
chenguestc
木虫 (职业作家)
- MolEPI: 7
- 应助: 576 (博士)
- 贵宾: 0.4
- 金币: 4526.9
- 散金: 1639
- 红花: 176
- 帖子: 4708
- 在线: 353.5小时
- 虫号: 1337860
- 注册: 2011-07-05
- 性别: GG
- 专业: 作物分子育种
5楼2012-10-03 23:01:00
5