应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于荧光定量的问题
51/1返回列表
查看: 1669  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

jerryzyy

金虫 (小有名气)

[求助] 关于荧光定量的问题

我做的是用荧光定量来分析土壤微生物的群落的大小的，我是用sybr green染料的我刚接触荧光定量，有几个不明白的问题还请大家帮帮忙？
1 我如何确定我是应该用相对定量还是绝对定量来做呢，我要用质粒来做标准曲线这个能说明我该用什么定量吗
2管家基因，目的基因和参比基因都是用来干什么的，能具体讲一下吗？
3什么情况下需要做标准曲线，还是都需要做
4 我是提的土壤DNA，我需要用常规的PCR先摸一下条件再做荧光定量吗、各种不懂啊
5我现在对荧光定量PCR的了解只是一段段的感觉连不起来，不能系统的知道，整个具体步骤应该怎么做，请大家帮帮忙啊，查的文献对于我这个初学者有点看不懂。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-10-03 10:43:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

可以设置一个空白对照即可。用灭菌双蒸水（如果你最后稀释CDNA时用的这个的话）做模板，该管PCR最后溶解曲线应该没有PEAK，是断续的，这样就说明你的实验可以排除水污染的问题。这个是阴性对照，如果你有其他阳性对照也可以加上，如果没有也没有关系。
赞一下 回复此楼
5楼2012-10-03 23:01:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

jerryzyy

金虫 (小有名气)
对了还有各种对照什么的都要有什么对照，该怎么设置啊
赞一下 回复此楼
2楼2012-10-03 10:48:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+4, 鼓励发帖交流问题。 2012-10-03 19:47:24
jerryzyy: 金币+20, ★★★很有帮助 2012-10-04 09:55:43
1 我如何确定我是应该用相对定量还是绝对定量来做呢，我要用质粒来做标准曲线这个能说明我该用什么定量吗
绝对定量把，用QPCR作相对定量那还不如用普通RTPCR了嘛哈。标准曲线在第三个问题里说。

2管家基因，目的基因和参比基因都是用来干什么的，能具体讲一下吗？
目的基因没有什么好说的，当然就是看你目的基因的表达量了啊。管家基因和参比基因是一回事（就是在不同生物的不同发育阶段其表达量基本一致，可以用来作为参照），是用来标准化你的目的基因的，楼主可以在GOOGLE里搜有一下NORMALISE, QPCR，应该有说明。

3什么情况下需要做标准曲线，还是都需要做
做绝对定量都需要，否则如何确定其绝对量呢，用质粒稀释成不同倍数作为模板，用你设计的特异引物来做即可。此外，你可以下载一个STEPONE SOFTWARE，里面有一些帮助说明，你可以仔细阅读一下。

4 我是提的土壤DNA，我需要用常规的PCR先摸一下条件再做荧光定量吗、各种不懂啊
是的，在做QPCR之前，是要用普通PCR摸索一下引物条件，一般是指大体退火温度。因为QPCR和普通PCR的BUFFER并不一致，因此，普通PCR结果只是给QPCR提供一个退火温度的参考。普通PCR退火温度摸索好后（例如60度为最适温度），做QPCR，就在60左右几度来做几个温度，找最好的条件就行了。

5我现在对荧光定量PCR的了解只是一段段的感觉连不起来，不能系统的知道，整个具体步骤应该怎么做，请大家帮帮忙啊，查的文献对于我这个初学者有点看不懂。
多看一点别人的有关QPCR的帖子，在实践中摸索可以，有不懂就随时到小木虫发问即可。
赞一下(3人) 回复此楼
3楼2012-10-03 12:47:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jerryzyy

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by chenguestc at 2012-10-03 12:47:47
1 我如何确定我是应该用相对定量还是绝对定量来做呢，我要用质粒来做标准曲线这个能说明我该用什么定量吗
绝对定量把，用QPCR作相对定量那还不如用普通RTPCR了嘛哈。标准曲线在第三个问题里说。

2管 ...

非常感谢你的解答啊，明白了不少东西，还有就是，我做荧光定量需要设置什么对照啊，对了，金币我应该怎么给你啊，我刚来，不太会玩这个额
赞一下 回复此楼
4楼2012-10-03 21:47:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 北京林业大学硕导招生广告 +3 kongweilin 2026-03-26 3/150 2026-03-26 00:53 by 15723253818
[考研] 0856求调剂 +5 zhn03 2026-03-25 6/300 2026-03-25 22:58 by peike
[考研] 招08考数学 +8 laoshidan 2026-03-20 17/850 2026-03-25 17:52 by 一个红太阳
[考研] 求b区院校调剂 +4 周56 2026-03-24 5/250 2026-03-25 17:12 by yishunmin
[考研] 各位老师您好：本人初试372分 +5 jj涌77 2026-03-25 6/300 2026-03-25 14:15 by mapenggao
[考研] 081700 调剂 267分 +10 迷人的哈哈 2026-03-23 10/500 2026-03-25 12:12 by userper
[考研] 0854电子信息求调剂 324 +4 Promise-jyl 2026-03-23 4/200 2026-03-25 11:36 by Sugarlight
[考研] 318求调剂 +3 plum李子 2026-03-23 3/150 2026-03-25 09:42 by 雾散后相遇lc
[考研] 318求调剂 +5 plum李子 2026-03-21 8/400 2026-03-25 09:26 by aa331100
[考研] 求调剂，一志愿:南京航空航天大学大学 ，080500材料科学与工程学硕，总分289分 +6 @taotao 2026-03-19 6/300 2026-03-25 08:37 by 木托莫露露
[考研] 一志愿南航材料专317分求调剂 +5 炸呀炸呀炸薯条 2026-03-23 5/250 2026-03-24 16:52 by 星空星月
[考研] 085404电子信息284分求调剂 +4 13659058978 2026-03-24 4/200 2026-03-24 12:15 by syl20081243
[基金申请] 请教下大家 2026年国家基金申请是双盲审吗？ +3 lishucheng1 2026-03-22 5/250 2026-03-24 08:22 by gltch
[考研] 335求调剂 +4 yuyu宇 2026-03-23 5/250 2026-03-23 23:49 by Txy@872106
[考研] 341求调剂(一志愿湖南大学070300) +5 番茄头--- 2026-03-22 6/300 2026-03-23 23:45 by Txy@872106
[考研] 336求调剂 +4 收到VS 2026-03-20 4/200 2026-03-23 19:02 by macy2011
[考研] 298求调剂 +8 上岸6666@ 2026-03-20 8/400 2026-03-23 11:02 by laoshidan
[考研] 276求调剂 +3 YNRYG 2026-03-21 4/200 2026-03-23 08:31 by 醉在风里
[考研] 352求调剂 +3 大米饭！ 2026-03-22 3/150 2026-03-22 23:28 by king123！
[考研] 一志愿华中科技大学071000，求调剂 +4 沿岸有贝壳6 2026-03-21 4/200 2026-03-22 07:21 by ilovexiaobin
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭