| 查看: 2702 | 回复: 5 | |||||
| 本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看 | |||||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||||
[交流]
毕赤酵母电转化问题
|
|||||
|
各位虫友大家好： 我用的酵母是毕赤酵母GS115，质粒是PIC3.5K和PIC9K，线性化酶是SacI 问题： 电转后涂MD板，每次都长得一片尸体装，旁边有单菌落也是非常的小，根本没办法挑起来继续往下做。所以我就干脆电转后涂G418为0.25mg/ml的YPD板，结果电转2天就会长出20个左右的单菌落，3-4天菌落就很大了，可以进行以后的实验。但我以后是做MD/MM筛选呢？还是继续扩大培养接种到高浓度的G418的板上啊？ 因为我看手册上说用SacI线性化的PIC3.5K和PIC9K就是Mut+型的，我还需要进一步鉴定吗？考虑到毕赤酵母的生长周期较长，我想偷下懒，因为之前没有人指导，我初做酵母，浪费不少时间，想把实验进展快一点，请问不鉴定可以吗？ 希望各位虫友多多指教 谢谢  |
回复此楼» 收录本帖的淘贴专辑推荐
 【分子生物】EPI帖 | 木质素含量测定 |
» 猜你喜欢
二苄基磷酰氯，磷酸接酚羟基，
已经有11人回复
-
二苄基磷酰氯，磷酰氯
已经有10人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有265人回复
-
酸酐或者羧酸酰氯化
已经有15人回复
-
酚羟基接入磷酸，磷酸酯化
已经有26人回复
-
土壤中可溶性有机碳种类
已经有1人回复
-
韩国海关检测食用植物油中的苯并芘用的是哪种方法？
已经有0人回复
-
现有pP43NMK质粒，想换了pHT43，或者其他芽孢杆菌过表达质粒
已经有5人回复
-
请教脂质体包裹miRNA
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 电转毕赤酵母后，在MD平板上得到上千克隆，可是在G418 上一个也没有，正常吗？
已经有17人回复
- 使用刚果红染色法测纤维素酶活
已经有5人回复
- 求助关于毕赤酵母电转抗性的问题
已经有5人回复
- 【征文】一个小硕的三年
已经有67人回复
- 关于毕赤酵母电转化
已经有10人回复
- 酵母菌被摇成豆腐渣了，急急急！！！
已经有21人回复
- 毕赤酵母表达过程中线性化DNA去磷酸化的问题
已经有6人回复
- 求助：毕赤酵母电转化
已经有5人回复
- 毕赤酵母GS115--pPIC9K电转化问题
已经有4人回复
- 有人知道毕赤酵母 氯化锂转化里面鲑鱼精 怎么配制的不？
已经有3人回复
- 毕赤酵母转化表达
已经有13人回复
- 毕赤酵母转化问题
已经有12人回复
- 求助毕赤酵母电转化问题
已经有6人回复
- 【求助/交流】关于毕赤酵母电转化
已经有22人回复
- 【求助/交流】求助毕赤酵母电转化
已经有4人回复
- 【求助/交流】关于毕赤酵母电转后PCR验证问题
已经有20人回复
- 【求助/交流】毕赤酵母电转化问题
已经有5人回复
- 电转化注意事项
已经有14人回复
- 毕赤酵母表达（总是整合不上）
已经有17人回复
» 抢金币啦！回帖就可以得到:
-
【社招】中国医学科学院药用植物研究所 2024年度社会公开招聘公告
+1/182
-
善准科技石英管真空封管机，粉末和块体样品均可石英管真空密封
+1/89
-
90后男广东或合肥真诚征婚(征到即删，长期有效)
+1/81
-
复旦大学文物与博物馆学系王金华教授团队招聘科研助理
+1/66
-
博后特助这周能公布吗？面临出站
+1/60
-
中国科学院兰州化学物理研究所杨军丽团队科研助理招聘信息（有机合成方法学及全合成研
+1/40
-
大湾区大学（筹）张国强课题组招聘光催化方向博士后及特聘研究员
+1/32
-
YY/T 1841-2022心脏电生理标测系统
+1/31
-
厦门市某高中急需招聘高中老师若干名待遇丰厚
+1/30
-
北京，京津冀，地区征女友
+1/24
-
中国科学院重庆绿色智能技术研究院招聘科研助理（无机非金属复合材料）
+1/7
-
江苏省农科院植保所小麦病害防控团队诚招博士后
+1/7
-
科学计算与机器学习方向博士后招聘-深圳大学-KAUST
+1/7
-
西北工业大学 力学与土木建筑学院 断裂力学计算仿真方向 招收硕士研究生
+1/5
-
吉林大学化学学院生物高分子材料院士团队招聘硕士生及硕博连读生
+1/5
-
2024CSC申请意大利的出结果了吗？
+1/5
-
香港中文大学（深圳）管君课题组 纳米光子学 招收硕士/博士/博士后
+1/4
-
一家专门做高纯度化学品提纯的公司，有前途吗？
+1/4
-
类器官/器官芯片/微流控 青年教师PI招聘
+1/3
-
深圳大学高等研究院暑期夏令营
+1/1
+1/182
6楼2012-09-30 15:36:00
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
475502411(金币+1): 谢谢参与
475502411: 金币+10 2012-09-26 08:44:20
小丹木木: 金币+5, MolEPI+1, 鼓励交流经验 2012-10-01 19:58:29
475502411(金币+1): 谢谢参与
475502411: 金币+10 2012-09-26 08:44:20
小丹木木: 金币+5, MolEPI+1, 鼓励交流经验 2012-10-01 19:58:29
|
1.你电转的时间是多少呢，一般4-5毫秒最好 2、一片尸体状是长满板吗？？电转效率很高，建议最后一把加山梨醇1ml.涂布100微升就好了。 3.PIC3.5K这个载体应该是指PPICZαA这个载体吧，这个载体的抗性是博来霉素的，应该涂布YPD+博来霉素平板。 4、SacI线性化的PIC3.5K和PIC9K就是Mut+型的？？ 这个是不需要鉴定的，酵母表达手册里面说明白了。表型的影响可以参考华东理工的一片文章，说是表型对酵母发酵的影响，鉴定也可以，用通用引物进行基因组PCR，看有多少目的带。 5.MD再筛选是没有意义的，建议使用菌落PCR鉴定。 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
4755024112楼2012-09-25 21:08:19
5楼2012-09-26 08:44:13
