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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 转化质粒时寄主菌本身有质粒会有影响吗？
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路程

新虫 (初入文坛)

[求助] 转化质粒时寄主菌本身有质粒会有影响吗？

最近在做转化，寄主菌本身有质粒，转化质粒抗性筛选后提质粒跑电泳，发现提出来的东西从位置上判断既不和内源质粒一样又不和转化的质粒一样是怎么回事呢？
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1楼 2012-09-23 18:50:34
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gwd0312

木虫 (正式写手)

“无冕之王”

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
路程: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-11-02 12:10:37
你可以将提取的质粒做个PCR检测一下，是否可以P出来你要的片段！
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持之以恒、永不放弃！
2楼2012-09-23 23:10:24
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once1015

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可能是技术问题，把质粒提断了， 变成开环 或者线性的了。
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3楼2012-09-24 15:55:15
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路程

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gwd0312 at 2012-09-23 23:10:24
你可以将提取的质粒做个PCR检测一下，是否可以P出来你要的片段！

谢谢，手上没有引物~~~
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4楼2012-09-24 22:36:53
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路程

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by once1015 at 2012-09-24 15:55:15
可能是技术问题，把质粒提断了， 变成开环 或者线性的了。

谢谢
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5楼2012-09-24 22:37:07
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路程

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by once1015 at 2012-09-24 15:55:15
可能是技术问题，把质粒提断了， 变成开环 或者线性的了。

谢谢，做过酶切，位置也不对，图像很怪异，从点样孔开始呈弥散状，内源质粒和转花前的质粒用同种酶切结果正常
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6楼2012-09-24 22:52:33
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路程

新虫 (初入文坛)
求大神相助啊~~~~~~~
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7楼2012-09-25 19:56:49
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fhda142

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你试过用几个不同的酶去切吗，最好是你外源质粒上有酶切位点而宿主本身的质粒上没有的酶来切~
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8楼2012-09-26 09:08:32
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fhda142

铜虫 (小有名气)
设计个引物P一下也是正解
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9楼2012-09-26 09:09:02
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路程

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by fhda142 at 2012-09-26 09:08:32
你试过用几个不同的酶去切吗，最好是你外源质粒上有酶切位点而宿主本身的质粒上没有的酶来切~

谢谢您的建议，已经试过不同的酶去单酶切，酶切结果一样的弥散状，选择的酶都是在外源质粒上有单酶切位点，不知道内源质粒的具体情况，同时做了三种质粒的同种酶切，发现已知的外源质粒酶切后现象正常，转化后的外源质粒呈弥散状，内源质粒几乎无变化所以初步判定为无该酶切位点
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10楼2012-09-27 12:56:56
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