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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » PCR空白跑出了与目的基因一样的一条浅带
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yixuan1

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR空白跑出了与目的基因一样的一条浅带已有4人参与

我最近PCR时，空白跑出了目的基因的条带，不过条带比较浅，阳性对照的比较亮，阴性对照没有。我把枪头，引物，配胶的溶剂以及电泳液都换成新的了，可是还是有条带，哪位好心的大侠指点下，这是哪里出了问题了呀？
PS:以前没有
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1楼2012-09-18 17:48:55
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

gaorongbest

新虫 (小有名气)
★ ★
wizardfan: 金币+2, 很详细的经验分享，赞 2012-09-19 05:43:03
你做的是DNA的PCR还是RNA反转录呢？我排查了一下，PCR无非就那么几个关键的东西，一般最容易污染的是引物，但是引物已经换了；枪头一般都是一次性的影响不大，RNA的话对配胶容器要求严格；那最可能就是水污染了（还有：空白和模板是在一起的还是空白空中溢入模板DNA了？），你的水是高压后分装用吗？最好换一支水试试，其他的没了。
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为客户提供更好的科研外包服务：如分子、免疫、病理、细胞培养、动物实验等
3楼2012-09-18 20:56:52
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普通回帖

无疆@行者

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+1, 鼓励发帖交流 2012-09-19 05:43:25
你得说清楚阴性对照是什么，是无模板吗？如果是的话可能是引物或者水有问题
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2楼2012-09-18 18:30:54
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hch123

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你可以试试PCR时，先加混合液，再加空白，再加模版。实验室经验，但有时很有用。还是不行的话，建议你换下试剂，尤其是水。
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脚踏实地：遇一个，学一个，会一个。。。
4楼2012-09-19 08:34:53
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px323

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我也有过这种情况，八成是水的问题
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5楼2012-09-19 08:52:31
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david0308

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
最有可能的情况是水的问题，水可以新换一管试一试，如果还有的话，那么请在无菌的条件下添加试剂，其实做PCR最好是在超净台中进行，这样可以避免空气中的杂菌污染，有的时候不加模版都能有条带出现的。
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哈哈
6楼2012-09-19 09:52:33
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yixuan1

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 无疆@行者 at 2012-09-18 18:30:54
你得说清楚阴性对照是什么，是无模板吗？如果是的话可能是引物或者水有问题

因为我的PCR是鉴定小鼠基因型的，所以阴性对照是WT，即B6小鼠的DNA；空白是水
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7楼2012-09-19 17:33:20
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yixuan1

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by gaorongbest at 2012-09-18 20:56:52
你做的是DNA的PCR还是RNA反转录呢？我排查了一下，PCR无非就那么几个关键的东西，一般最容易污染的是引物，但是引物已经换了；枪头一般都是一次性的影响不大，RNA的话对配胶容器要求严格；那最可能就是水污染了（还 ...

我的上样顺序是模板，阳参，阴性，空白。阴性里没有条带，空白里有淡淡阳性条带。
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8楼2012-09-19 17:36:39
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yixuan1

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by hch123 at 2012-09-19 08:34:53
你可以试试PCR时，先加混合液，再加空白，再加模版。实验室经验，但有时很有用。还是不行的话，建议你换下试剂，尤其是水。

谢谢，我试试
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9楼2012-09-19 17:37:03
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yixuan1

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by px323 at 2012-09-19 08:52:31
我也有过这种情况，八成是水的问题

当初我也怀疑是水的问题，然后水都换了，高压锅灭菌水，而且用的是不同批次的。
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10楼2012-09-19 17:52:18
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