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yixuan1

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR空白跑出了与目的基因一样的一条浅带 已有4人参与

我最近PCR时,空白跑出了目的基因的条带,不过条带比较浅,阳性对照的比较亮,阴性对照没有。我把枪头,引物,配胶的溶剂以及电泳液都换成新的了,可是还是有条带,哪位好心的大侠指点下,这是哪里出了问题了呀?
PS:以前没有
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yixuan1

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 无疆@行者 at 2012-09-18 18:30:54
你得说清楚阴性对照是什么,是无模板吗?如果是的话可能是引物或者水有问题

因为我的PCR是鉴定小鼠基因型的,所以阴性对照是WT,即B6小鼠的DNA;空白是水
7楼2012-09-19 17:33:20
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查看全部 17 个回答

无疆@行者

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+1, 鼓励发帖交流 2012-09-19 05:43:25
你得说清楚阴性对照是什么,是无模板吗?如果是的话可能是引物或者水有问题
2楼2012-09-18 18:30:54
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gaorongbest

新虫 (小有名气)

★ ★
wizardfan: 金币+2, 很详细的经验分享,赞 2012-09-19 05:43:03
你做的是DNA的PCR还是RNA反转录呢?我排查了一下,PCR无非就那么几个关键的东西,一般最容易污染的是引物,但是引物已经换了;枪头一般都是一次性的影响不大,RNA的话对配胶容器要求严格;那最可能就是水污染了(还有:空白和模板是在一起的还是空白空中溢入模板DNA了?),你的水是高压后分装用吗?最好换一支水试试,其他的没了。
为客户提供更好的科研外包服务:如分子、免疫、病理、细胞培养、动物实验等
3楼2012-09-18 20:56:52
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hch123

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你可以试试PCR时,先加混合液,再加空白,再加模版。实验室经验,但有时很有用。还是不行的话,建议你换下试剂,尤其是水。
脚踏实地:遇一个,学一个,会一个。。。
4楼2012-09-19 08:34:53
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