4楼: Originally posted by xiaodao1 at 2012-09-16 22:51:59
我线性化后一般直接做了胶回收，用尽量少的无菌水洗脱，让质粒尽量弄。另外加山梨醇重悬的时候，没有具体的量，一般100mL的菌液做的感受态细胞，最后我是加200-400uL重悬，而且根据具体情况，尽量少加，让感受态细 ...

10楼: Originally posted by 475502411 at 2012-09-18 12:45:15
好的，我再转吧。你能不能给我详细写一下你做感受态及电转化的操作的具体步骤？我真怕是操作的问题，谢谢了！
还有转化的参数是什么？谢谢...

12楼: Originally posted by reallpf at 2012-09-18 13:27:19
我在资源帖中发过感受态制备过程和转化。过程没有那么严格，步骤也都也的比较清楚。现做现用的要求要严格些。长期保存的主要是BEDS和DTT处理，没有什么特殊之处。我这说要写好多，你下载看看吧，更简单。...

13楼: Originally posted by 475502411 at 2012-09-18 14:27:48
谢谢，好的，这是我的操作步骤，你看有问题吗？
感受态的制备：过夜培养的OD =1.4，取100ml离心---用25ml冰浴灭菌水重悬离心---用12.5ml冰浴灭菌水重悬离心----用2ml冰浴1M山梨醇重悬离心-------用300微升1M山梨醇 ...

13楼: Originally posted by 475502411 at 2012-09-18 14:27:48
谢谢，好的，这是我的操作步骤，你看有问题吗？
感受态的制备：过夜培养的OD =1.4，取100ml离心---用25ml冰浴灭菌水重悬离心---用12.5ml冰浴灭菌水重悬离心----用2ml冰浴1M山梨醇重悬离心-------用300微升1M山梨醇 ...

15楼: Originally posted by reallpf at 2012-09-18 21:42:56
个人觉得你的步骤没有什么变化。由于酵母的细胞壁是很厚的，感受态的制备过程中只有山梨醇处理没有什么效果。建议你用http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=4760057长期感受态制备方法。另外电转的参数都是一样 ...

15楼: Originally posted by reallpf at 2012-09-18 21:42:56
个人觉得你的步骤没有什么变化。由于酵母的细胞壁是很厚的，感受态的制备过程中只有山梨醇处理没有什么效果。建议你用http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=4760057长期感受态制备方法。另外电转的参数都是一样 ...

17楼: Originally posted by 475502411 at 2012-09-19 10:12:47
您好，我还想问一下我要是现做感受态立即用，是不是可以用山梨醇的方法，因为我看了您给我发的那个连接，好几个试剂我们实验室都是没有的，买的话我问了要等到下周，我想这周做一次？
还有，线性化完不用去磷酸化 ...

19楼: Originally posted by foxcl at 2012-09-20 14:22:16
1、OD600没有问题，初始在1.2-1.6都可以。剩下的做感受态也没啥问题。
　　不过最好现用现配。-80保存也是可以的。
２、线性化→ＤＮＡ清洁试剂盒回收（最后一步用６５度纯水洗脱，要是用ＴＥ的话，电转体系中盐离 ...