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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 毕赤酵母电转化问题求助
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475502411

铜虫 (著名写手)
送鲜花一朵
引用回帖:
18楼: Originally posted by reallpf at 2012-09-20 10:13:25
现做现用的感受态方法http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=4734449。如果着急做可以用你自己的方法，转化量加大点看有没有结果。
线性化完不用去磷酸化，直接cycle-pure回收（DNA片段直接回收试剂盒），胶回 ...

嗯，谢谢，我这次做事大量线性化，然后直接用DNA回收试剂盒回收的
希望呢做出来
谢谢
有问题再请教你
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可以朝九晚五，也能浪迹天涯
21楼2012-09-21 14:48:04
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475502411

铜虫 (著名写手)
引用回帖:
19楼: Originally posted by foxcl at 2012-09-20 14:22:16
1、OD600没有问题，初始在1.2-1.6都可以。剩下的做感受态也没啥问题。
　　不过最好现用现配。-80保存也是可以的。
２、线性化→ＤＮＡ清洁试剂盒回收（最后一步用６５度纯水洗脱，要是用ＴＥ的话，电转体系中盐离 ...

我之前直接用的点转仪上的参数，今天重新做，按你给我的参数做，有问题我在请教你
谢谢了
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可以朝九晚五，也能浪迹天涯
22楼2012-09-21 14:50:09
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foxcl

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
20楼: Originally posted by 475502411 at 2012-09-21 14:46:45
非常感谢
但是我昨天做的线性化，没有有加热的水洗脱，不过切了12微克的质粒，用25微升水洗脱的
我按你给我说的做一遍，转化后直接涂G418板，因为在MD板上长得好多，好小
希望能做出来
谢谢...

你的G418浓度多少？
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

475502411
23楼2012-09-21 23:59:05
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foxcl

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
22楼: Originally posted by 475502411 at 2012-09-21 14:50:09
我之前直接用的点转仪上的参数，今天重新做，按你给我的参数做，有问题我在请教你
谢谢了...

好的啊。电击完会显示个电击时间，大概在4－5ms左右。希望顺利啊。
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24楼2012-09-22 00:00:17
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475502411

铜虫 (著名写手)
送鲜花一朵
引用回帖:
23楼: Originally posted by foxcl at 2012-09-21 23:59:05
你的G418浓度多少？...

涂的是0.25的板，前天下午晚上七点左右涂的板，现在还没有长出来，但是因为图的比较多400-600微升，所以有白白的大片，但不知道再培养两天阳性转化子会不会以比较大的菌落长出来
谢谢
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可以朝九晚五，也能浪迹天涯
25楼2012-09-23 08:53:45
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jane晨宝儿

铜虫 (初入文坛)
我觉得有可能是你转化用的质粒浓度太低，之前我做的时候也是没有转化出来，后来在线性化这一步，我做了大体系，取一小部分跑胶，确定切开之后，用剩下的直接电转，没有进行回收这一步，因为我觉得回收后，浓度太低，不利于转化。反正我就是这样转化成功了，希望能对你有帮助~~
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26楼2012-12-09 22:49:55
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十五进制

木虫 (正式写手)
请问下质粒线性化，那个体系是什么，我最近也要做但不知道体系如何确定，用的是ne的salI
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27楼2014-07-08 14:57:14
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