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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 跑SDS-PAGE电泳时出现问题，求助！谢谢
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蒲公英嘟嘟

新虫 (小有名气)

[求助] 跑SDS-PAGE电泳时出现问题，求助！谢谢

最近在做SDS-PAGE电泳时总是出现胶的下半部分跑的不好，模糊，还有点收缩的样子，Marker下面的条带也不好，求助请各位前辈，谢谢

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1楼 2012-09-12 21:01:14
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

蒲公英嘟嘟

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by ybs007 at 2012-09-13 16:29:41
你可以再提高一下，以前因为我的目的蛋白很小，所以试过15%+12%的双层分离胶 ，后来直接用梯度胶跑了。...

需要用梯度的吗？我的目的蛋白在上面，大约在Markerde 第四条带那，就是想跑一个好点的图
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10楼2012-09-14 15:39:51
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ybs007

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
最下面的MARKER是6.5KDa的吧。怎么这么像我师妹跑的。。。延长凝胶时间，提高分离胶浓度试试
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平生我自知
2楼2012-09-13 07:42:01
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蒲公英嘟嘟

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ybs007 at 2012-09-13 07:42:01
最下面的MARKER是6.5KDa的吧。怎么这么像我师妹跑的。。。延长凝胶时间，提高分离胶浓度试试

是的，最下面的是6.5KDa，分离胶用的12%的。还要提高吗？我延长凝胶时间试试，谢谢您的帮助，这个问题困扰了好久了……
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3楼2012-09-13 10:45:49
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
分离胶的tris-hcl PH是不是不准了？
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4楼2012-09-13 11:03:55
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ybs007

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
蒲公英嘟嘟: 金币+1, ★有帮助 2012-09-14 15:40:02
引用回帖:
3楼: Originally posted by 蒲公英嘟嘟 at 2012-09-13 10:45:49
是的，最下面的是6.5KDa，分离胶用的12%的。还要提高吗？我延长凝胶时间试试，谢谢您的帮助，这个问题困扰了好久了……...

你可以再提高一下，以前因为我的目的蛋白很小，所以试过15%+12%的双层分离胶 ，后来直接用梯度胶跑了。
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平生我自知
5楼2012-09-13 16:29:41
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flttljf

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
电压方面注意了吗？我一直就用90V的跑，感觉还可以的
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6楼2012-09-13 16:31:37
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德馨居

金虫 (小有名气)

上校
我感觉是胶的问题，你可以试试吧配胶的所有成分都换成新的试试！
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西伯利亚狼
7楼2012-09-13 17:53:19
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蒲公英嘟嘟

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by flttljf at 2012-09-13 16:31:37
电压方面注意了吗？我一直就用90V的跑，感觉还可以的

谢谢你的帮助，你一直用90V，分离胶没有改变电压吗？
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8楼2012-09-14 15:33:48
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蒲公英嘟嘟

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 德馨居 at 2012-09-13 17:53:19
我感觉是胶的问题，你可以试试吧配胶的所有成分都换成新的试试！

谢谢你，我都换成新的了啊，可是还是这个样子
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9楼2012-09-14 15:36:56
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