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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 以前能p出的基因现在p不出来了
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aqingkl

新虫 (初入文坛)

[求助] 以前能p出的基因现在p不出来了

我的基因6月份的时候p出来了，然后7月份生病回家了，中途做pcr的试剂放在冰箱里面，但是由于冰箱门没关紧，试剂都融化了。8月份再做pcr就p不出来了，我怀疑是引物坏掉了，就再做了一次梯度pcr试一试，发现在以前能p出的温度条件下，电泳呈现弥散的效果。请问这是什么原因啊？
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1楼 2012-09-02 16:08:28
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实心小白菜

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
amisking: 回帖置顶 2012-09-02 19:17:29
引物坏掉了，我是6月份订的引物稀释了用，8月末死活P不出来，于是重新稀释了一管，还是P不出来，幸好还有干粉，于是再稀释干粉用，就妥妥P出来了，先换引物，再不行的话考虑酶，buffer和水。如果什么都化了，其实那个酶也应该挂了。。。。。。。。。。。。
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有啥不高兴的事儿，说出来大家乐呵乐呵~
3楼2012-09-02 18:40:53
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mgangle

铁杆木虫 (著名写手)

乐乐家族-----乐颠颠

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
很有可能是你的引物，模板都降解了，一般引物合成都是分装为两管，你用新的引物试试
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麦兜麦兜~~~我要一碗鱼丸粗面。。对不起，么有鱼丸粗面。。那，我要鱼丸么有鱼丸那，我要粗面…………么有粗面那，我要鱼丸粗面……………………
2楼2012-09-02 17:03:50
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aqingkl

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 实心小白菜 at 2012-09-02 18:40:53
引物坏掉了，我是6月份订的引物稀释了用，8月末死活P不出来，于是重新稀释了一管，还是P不出来，幸好还有干粉，于是再稀释干粉用，就妥妥P出来了，先换引物，再不行的话考虑酶，buffer和水。如果什么都化了，其实那 ...

我也觉得有道理，我的引物已经去重新合成了，等引物回来我试试看结果怎么样，谢谢啊
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4楼2012-09-03 11:17:08
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aqingkl

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by mgangle at 2012-09-02 17:03:50
很有可能是你的引物，模板都降解了，一般引物合成都是分装为两管，你用新的引物试试

模板我是重新制备的，模板应该没有问题
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5楼2012-09-03 11:17:52
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