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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 以前能p出的基因现在p不出来了
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aqingkl

新虫 (初入文坛)

[求助] 以前能p出的基因现在p不出来了

我的基因6月份的时候p出来了，然后7月份生病回家了，中途做pcr的试剂放在冰箱里面，但是由于冰箱门没关紧，试剂都融化了。8月份再做pcr就p不出来了，我怀疑是引物坏掉了，就再做了一次梯度pcr试一试，发现在以前能p出的温度条件下，电泳呈现弥散的效果。请问这是什么原因啊？
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1楼 2012-09-02 16:08:28
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mgangle

铁杆木虫 (著名写手)

乐乐家族-----乐颠颠

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
很有可能是你的引物，模板都降解了，一般引物合成都是分装为两管，你用新的引物试试
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麦兜麦兜~~~我要一碗鱼丸粗面。。对不起，么有鱼丸粗面。。那，我要鱼丸么有鱼丸那，我要粗面…………么有粗面那，我要鱼丸粗面……………………
2楼2012-09-02 17:03:50
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实心小白菜

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
amisking: 回帖置顶 2012-09-02 19:17:29
引物坏掉了，我是6月份订的引物稀释了用，8月末死活P不出来，于是重新稀释了一管，还是P不出来，幸好还有干粉，于是再稀释干粉用，就妥妥P出来了，先换引物，再不行的话考虑酶，buffer和水。如果什么都化了，其实那个酶也应该挂了。。。。。。。。。。。。
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有啥不高兴的事儿，说出来大家乐呵乐呵~
3楼2012-09-02 18:40:53
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aqingkl

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 实心小白菜 at 2012-09-02 18:40:53
引物坏掉了，我是6月份订的引物稀释了用，8月末死活P不出来，于是重新稀释了一管，还是P不出来，幸好还有干粉，于是再稀释干粉用，就妥妥P出来了，先换引物，再不行的话考虑酶，buffer和水。如果什么都化了，其实那 ...

我也觉得有道理，我的引物已经去重新合成了，等引物回来我试试看结果怎么样，谢谢啊
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4楼2012-09-03 11:17:08
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aqingkl

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by mgangle at 2012-09-02 17:03:50
很有可能是你的引物，模板都降解了，一般引物合成都是分装为两管，你用新的引物试试

模板我是重新制备的，模板应该没有问题
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5楼2012-09-03 11:17:52
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aqingkl

新虫 (初入文坛)
怎么办，我新合成了引物，新用的试剂和酶还是p不出来 ，快伤心死了
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6楼2012-09-04 15:29:44
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gwd0312

木虫 (正式写手)

“无冕之王”

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
6楼: Originally posted by aqingkl at 2012-09-04 15:29:44
怎么办，我新合成了引物，新用的试剂和酶还是p不出来 ，快伤心死了

这样的情况很少见啊，全是新的，PCR体系也是一样的，按说只能从你的模版找原因了。你换个其他基因的引物试一下你的模版呗！
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持之以恒、永不放弃！
7楼2012-09-04 19:09:06
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btx362237729

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-09-05 13:53:12
aqingkl: 金币+1, ★有帮助 2012-09-11 20:47:47
引物的话我觉得当然又坏掉的可能，主要是我觉得还是taq酶或者是你用的mix坏掉了。。。换新的不就好

引物合一次怎么有用不完啊 都换新的。。。这个没啥好纠结的

PCR很稳定，P成功了一次，以后不应该P不出来的
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人生最黑暗的时光终于过去了
8楼2012-09-04 19:15:13
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