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蝈蝈虫26

新虫 (初入文坛)

[求助] 将基因扩成三段，想将三段拼接，但是拼接位点没有合适的酶切位点

我的基因加上启动子大概是8.6KB，我扩成了三段，想将这三段进行拼接，因为在扩增的时候有重复的区间，但是这三个重复的区间没有合适的酶切位点，不知道怎么才能将这三段拼接成完整的一段基因序列。
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1楼 2012-08-27 13:53:20
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mgangle

铁杆木虫 (著名写手)

乐乐家族-----乐颠颠

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
（1）可以将三个片段的PCR产物加到一块作为模板，以第一个片段的上游和第三个片段的下游作为引物扩增，有可能获得一个完整片段，因为你的基因有8.6kb，因此这个就要全凭人品啦！
（2）有些氨基酸有多个密码子，因此适当的在不改变氨基酸的前提下突变某几个碱基，成为可以用的酶切位点序列，产生一些新的酶切位点；这个就需要楼主自己去认真分析基因序列了。
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麦兜麦兜~~~我要一碗鱼丸粗面。。对不起，么有鱼丸粗面。。那，我要鱼丸么有鱼丸那，我要粗面…………么有粗面那，我要鱼丸粗面……………………
2楼2012-08-27 20:16:53
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