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1楼2012-08-26 10:02:31

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Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

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【答案】应助回帖

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小丹木木: 金币+3, 鼓励积极热心应助 2012-08-27 13:48:30

1：涂板后培养12个小时，平板不长菌或者只长五六个菌斑
平板不长菌，感受态细胞是否失活，可以做个对照，看看是否是感受态细胞的问题，如果不是，就要考虑转化过程是够出现操作失误，例如未在冰中进行转化，感受态在常温下放置过久失活，转化后摇菌时间过短，或者摇床速度过慢，没有把菌摇起来，如果不是转化过程出现的问题就要进一步考虑连接是否正确，连接时间12~16h，体系一般6ul-10ul，目的片段：载体一般1:3~1:10.
只长五六个菌PCR检测空白或者目的条带不对，这个你可以考虑做蓝白斑，初步可以筛掉一大批的假阳性，目的条带不对估计是载体自连了.
另外卫星菌落的话不需要太顾虑，培养时间久了，氨苄降解了很多假阳性自然就长出来了，氨苄只是抑制不是杀死，一般12h内的菌落都不会出现卫星菌落.
祝楼主好运.