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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 转化大肠杆菌平板出现卫星菌落是怎么回事？
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linda90

禁虫 (初入文坛)
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1楼 2012-08-26 10:02:31
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Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励积极热心应助 2012-08-27 13:48:30
1：涂板后培养12个小时，平板不长菌或者只长五六个菌斑
平板不长菌，感受态细胞是否失活，可以做个对照，看看是否是感受态细胞的问题，如果不是，就要考虑转化过程是够出现操作失误，例如未在冰中进行转化，感受态在常温下放置过久失活，转化后摇菌时间过短，或者摇床速度过慢，没有把菌摇起来，如果不是转化过程出现的问题就要进一步考虑连接是否正确，连接时间12~16h，体系一般6ul-10ul，目的片段：载体一般1:3~1:10.
只长五六个菌PCR检测空白或者目的条带不对，这个你可以考虑做蓝白斑，初步可以筛掉一大批的假阳性，目的条带不对估计是载体自连了.
另外卫星菌落的话不需要太顾虑，培养时间久了，氨苄降解了很多假阳性自然就长出来了，氨苄只是抑制不是杀死，一般12h内的菌落都不会出现卫星菌落.
祝楼主好运.
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Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
7楼2012-08-27 10:22:13
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sl35537417

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流问题。 2012-08-26 18:19:02
微型菌落是氨苄降解后生长的杂菌  可以将培养时间控制在12h-16h之间  
或者更换抗生素为羧苄青霉素，你的载体是什么？双酶切？估计是连接效率不高？
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2012-08-26 11:03:56
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fjtony163

版主 (文坛精英)

米米

优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-08-27 13:48:02
那个小菌落跟你期望没啥关系，
你知道你那个目的片段的copy的量大概多少，如果太低可以用IPTG增加copy，然后吧培养时间缩短成有梯度的，再看看载体上有别的resistance没有。
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3楼2012-08-26 17:39:43
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linda90

禁虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
4楼2012-08-26 20:43:18
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