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linda90

禁虫 (初入文坛)
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1楼2012-08-26 10:02:31
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linda90

禁虫 (初入文坛)
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4楼2012-08-26 20:43:18
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sl35537417

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
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amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流问题。 2012-08-26 18:19:02
微型菌落是氨苄降解后生长的杂菌  可以将培养时间控制在12h-16h之间  
或者更换抗生素为羧苄青霉素，你的载体是什么？双酶切？估计是连接效率不高？
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2楼2012-08-26 11:03:56
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fjtony163

版主 (文坛精英)

米米

优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★
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小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-08-27 13:48:02
那个小菌落跟你期望没啥关系，
你知道你那个目的片段的copy的量大概多少，如果太低可以用IPTG增加copy，然后吧培养时间缩短成有梯度的，再看看载体上有别的resistance没有。
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3楼2012-08-26 17:39:43
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aofeng860308

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
4楼: Originally posted by linda90 at 2012-08-26 20:43:18
载体是takara公司的18-T，没有酶切...

T载体是可以通过蓝白斑筛选的啊，如果目的基因纯的话直接挑取白斑测序就好了，不用做菌落PCR的。长卫星菌落最主要的一个原因就是培养基温度太高时就加入氨苄青霉素，导致氨苄被破坏，就很容易长卫星菌落了。
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5楼2012-08-26 21:32:05
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