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1楼2012-08-25 16:06:58

haozi1989

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看峰图测序应该没问题。。换家公司测序试试。我们实验室出个引物给合成错误的现象。你问下你的引物合成公司

很多我们以为一辈子都不会忘记的事情，就在我们念念不忘的日子里，被我们遗忘了....

2楼2012-08-25 18:17:21

chenguestc

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对测序又疑问的时候，最好的办法是：尽量多测一些序列，全部两端测序。这样才有说服力。仅仅一个序列没有统计规律，无法说清具体是测序问题，还是扩增问题。。。。。。

3楼2012-08-25 21:55:55

jjg0912

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小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-08-27 13:45:01

对于一个载体构建，我一般都挑4个单克隆用10微升水稀释，一半作菌落PCR。一般转移到一个平板上生长。然后根据PCR结果，提取质粒。一般我每次送两个质粒出去测序，而且一般都是双向测序，这样比较稳妥。一般每次都能拿到一个理想的结果，虽然费点钱，可是节约了时间，提高了效率，感觉还蛮好的。

4楼2012-08-26 06:16:20

mitocam

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应该是引物设计时搞错了序列，查查合成引物的碱基序列。

5楼2012-08-26 07:26:35

liuyu_sdili

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引用回帖:

5楼: Originally posted by mitocam at 2012-08-26 07:26:35
应该是引物设计时搞错了序列，查查合成引物的碱基序列。

我检查过我的引物合成订单，没有问题啊

6楼2012-08-26 09:04:55

liuyu_sdili

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引用回帖:

4楼: Originally posted by jjg0912 at 2012-08-26 06:16:20
对于一个载体构建，我一般都挑4个单克隆用10微升水稀释，一半作菌落PCR。一般转移到一个平板上生长。然后根据PCR结果，提取质粒。一般我每次送两个质粒出去测序，而且一般都是双向测序，这样比较稳妥。一般每次都能 ...

你的意思是我应该再测几个克隆？

7楼2012-08-26 09:06:13