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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助】急~~测序发现在引物位置发现一个碱基缺失
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jjg0912

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
liuyu_sdili: 金币+2, ★有帮助 2012-08-26 17:45:12
liuyu_sdili: 金币+1, ★有帮助 2012-08-26 17:45:53
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-08-27 13:45:31
是的，我感觉不是你引物的问题。我前段时间构建了几十个克隆。测序结果返回来的时候大部分是正常的，有的就出现你这样的结果，有缺失或者突变。这个时候不要气馁。你可以再挑几个单克隆做菌落PCR。然后选择两个提质粒，然后送出去双向测序。应该至少有一个能成功。
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11楼2012-08-26 16:15:03
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jjg0912

木虫 (正式写手)
换个质粒再送出去测啦，没啥的，希望不要再犹豫了，一次成功的机会是有，可是有时候就是这样的，这个质粒缺失了，那就换一个好了。
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12楼2012-08-26 16:18:15
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jl860822

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
liuyu_sdili: 金币+1, ★有帮助 2012-08-27 18:05:04
重新合成一下引物吧，可能是引物合成的时候出现错误
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13楼2012-08-27 08:28:52
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lidonghong

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
liuyu_sdili: 金币+2, ★★★很有帮助, 谢谢啦 2012-08-29 18:00:45
从峰图上来看，是没有问题的，请问你这个位置在峰图上是多少位，前几十bp和七百以后有可能不准，可以双向测序确定下，另外多挑取几个单克隆测序看看
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生物化学与分子生物学
14楼2012-08-27 10:19:18
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liuyu_sdili

木虫 (正式写手)
内容已删除
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15楼2012-08-27 12:39:38
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yunbfly

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-08-28 13:43:13
引物缺失一个碱基很正常。以前我测序，发现有拷贝的引物居然在3‘端缺失好几个碱基，居然也扩出来了，难怪当时扩增总是很不稳定
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16楼2012-08-28 08:33:24
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