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jjg0912

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
liuyu_sdili: 金币+2, 有帮助 2012-08-26 17:45:12
liuyu_sdili: 金币+1, 有帮助 2012-08-26 17:45:53
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-08-27 13:45:31
是的,我感觉不是你引物的问题。我前段时间构建了几十个克隆。测序结果返回来的时候大部分是正常的,有的就出现你这样的结果,有缺失或者突变。这个时候不要气馁。你可以再挑几个单克隆做菌落PCR。然后选择两个提质粒,然后送出去双向测序。应该至少有一个能成功。
11楼2012-08-26 16:15:03
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jjg0912

木虫 (正式写手)

换个质粒再送出去测啦,没啥的,希望不要再犹豫了,一次成功的机会是有,可是有时候就是这样的,这个质粒缺失了,那就换一个好了。
12楼2012-08-26 16:18:15
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jl860822

金虫 (正式写手)


【答案】应助回帖


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liuyu_sdili: 金币+1, 有帮助 2012-08-27 18:05:04
重新合成一下引物吧,可能是引物合成的时候出现错误
13楼2012-08-27 08:28:52
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lidonghong

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
liuyu_sdili: 金币+2, ★★★很有帮助, 谢谢啦 2012-08-29 18:00:45
从峰图上来看,是没有问题的,请问你这个位置在峰图上是多少位,前几十bp和七百以后有可能不准,可以双向测序确定下,另外多挑取几个单克隆测序看看
生物化学与分子生物学
14楼2012-08-27 10:19:18
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liuyu_sdili

木虫 (正式写手)

内容已删除
15楼2012-08-27 12:39:38
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yunbfly

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-08-28 13:43:13
引物缺失一个碱基很正常。以前我测序,发现有拷贝的引物居然在3‘端缺失好几个碱基,居然也扩出来了,难怪当时扩增总是很不稳定
16楼2012-08-28 08:33:24
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