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skuy1223

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[交流] 酵母表达无目的蛋白

我最近做了一次酵母表达，但是做SDS-PAGE显示没有目的条带。但是电转之后的平板上长了很多菌落。并且挑单克隆之后，做菌液PCR也有目的基因的条带（但是也有杂带）。从条带上看，好像是蛋白降解比较严重。但是除了这个问题，不知道各位大神还能帮我分析下是什么原因吗？

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1楼 2012-08-17 10:50:48

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starseacow

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★
skuy1223(金币+1): 谢谢参与

我在做mbSUS时遇到过和楼主类似的问题，做western会有莫名其妙的条带出现，但是改进蛋白样品提取方法会有帮助。楼主的蛋白提取是怎么做的？可以考虑一方面缩短酵母培养时间，比如只培养若干小时，使OD600=0.6-0.8，在对数期和平台期获得样品做出来不太一样。另外，有些样品上样前不适合煮沸处理，可以考虑使用DTT常温处理。