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consist10

金虫 (正式写手)

[求助] 急求 多谢 关于大肠杆菌菌体总蛋白的提取

亲们,偶有问题请教大家,麻烦支招啊,现在快急死了。
我想从未转化任何载体的大肠杆菌中提取菌体总蛋白,但摇菌的时候是不是就是没有氨苄,卡纳等抗性了呢?没有抗性的话是不是容易有杂菌产生?摇菌的温度应还是37度的吧?另外,如果我用转化了表达载体的大肠杆菌提取菌体总蛋白,是不是不进行目的基因的诱导表达就可以了,因为此时目的基因还是核酸,未表达为蛋白,提取的菌体总蛋白就还是大肠杆菌的总蛋白,这么理解对吗?亲们,烦请支招啊,有金币酬谢大家。
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consist10

金虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by dshlove at 2012-08-17 12:14:57
你转化后,被转化的基因也就认为是菌体的基因了,所以,只要是能被表达的蛋白,就能算是总蛋白。
而且,这是你转化的基因还是与菌体本身自有的基因还是不同的,所以,通过诱导来表达。
个人观点啊,参考下。...

谢谢
5楼2012-08-17 13:29:08
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
consist10: 金币+5 2012-08-17 11:24:12
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-08-17 14:09:12
给点建议。
你做未转化蛋白的提取,建议选取本身带抗性的感受态,或者菌种,加上抗生素。这样可以避免杂菌蛋白的干扰。
如果你转化了,我的建议是诱导。因为你想得到总蛋白,所以你要将能表达蛋白的基因都用上,不能闲置某种能表达蛋白的基因,即使是需要诱导的。
2楼2012-08-17 10:05:35
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consist10

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by dshlove at 2012-08-17 10:05:35
给点建议。
你做未转化蛋白的提取,建议选取本身带抗性的感受态,或者菌种,加上抗生素。这样可以避免杂菌蛋白的干扰。
如果你转化了,我的建议是诱导。因为你想得到总蛋白,所以你要将能表达蛋白的基因都用上,不 ...

多谢您的建议。同意您说的未转化蛋白的提取的建议,但关于若转化了需要诱导的建议有点迷惑,我需要提取的是大肠杆菌菌体总蛋白,而不是转入的基因表达的蛋白,那么为什么要诱导呢?又为什么不能闲置呢?
3楼2012-08-17 11:14:11
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-08-17 14:09:25
引用回帖:
3楼: Originally posted by consist10 at 2012-08-17 11:14:11
多谢您的建议。同意您说的未转化蛋白的提取的建议,但关于若转化了需要诱导的建议有点迷惑,我需要提取的是大肠杆菌菌体总蛋白,而不是转入的基因表达的蛋白,那么为什么要诱导呢?又为什么不能闲置呢?...

你转化后,被转化的基因也就认为是菌体的基因了,所以,只要是能被表达的蛋白,就能算是总蛋白。
而且,这是你转化的基因还是与菌体本身自有的基因还是不同的,所以,通过诱导来表达。
个人观点啊,参考下。
4楼2012-08-17 12:14:57
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