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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 急求 多谢 关于大肠杆菌菌体总蛋白的提取
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consist10

金虫 (正式写手)

[求助] 急求 多谢 关于大肠杆菌菌体总蛋白的提取

亲们，偶有问题请教大家，麻烦支招啊，现在快急死了。
我想从未转化任何载体的大肠杆菌中提取菌体总蛋白，但摇菌的时候是不是就是没有氨苄，卡纳等抗性了呢？没有抗性的话是不是容易有杂菌产生？摇菌的温度应还是37度的吧？另外，如果我用转化了表达载体的大肠杆菌提取菌体总蛋白，是不是不进行目的基因的诱导表达就可以了，因为此时目的基因还是核酸，未表达为蛋白，提取的菌体总蛋白就还是大肠杆菌的总蛋白，这么理解对吗？亲们，烦请支招啊，有金币酬谢大家。
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1楼 2012-08-17 09:56:49
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consist10

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by dshlove at 2012-08-17 10:05:35
给点建议。
你做未转化蛋白的提取，建议选取本身带抗性的感受态，或者菌种，加上抗生素。这样可以避免杂菌蛋白的干扰。
如果你转化了，我的建议是诱导。因为你想得到总蛋白，所以你要将能表达蛋白的基因都用上，不 ...

多谢您的建议。同意您说的未转化蛋白的提取的建议，但关于若转化了需要诱导的建议有点迷惑，我需要提取的是大肠杆菌菌体总蛋白，而不是转入的基因表达的蛋白，那么为什么要诱导呢？又为什么不能闲置呢？
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3楼2012-08-17 11:14:11
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
consist10: 金币+5 2012-08-17 11:24:12
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-08-17 14:09:12
给点建议。
你做未转化蛋白的提取，建议选取本身带抗性的感受态，或者菌种，加上抗生素。这样可以避免杂菌蛋白的干扰。
如果你转化了，我的建议是诱导。因为你想得到总蛋白，所以你要将能表达蛋白的基因都用上，不能闲置某种能表达蛋白的基因，即使是需要诱导的。
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2楼2012-08-17 10:05:35
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-08-17 14:09:25
引用回帖:
3楼: Originally posted by consist10 at 2012-08-17 11:14:11
多谢您的建议。同意您说的未转化蛋白的提取的建议，但关于若转化了需要诱导的建议有点迷惑，我需要提取的是大肠杆菌菌体总蛋白，而不是转入的基因表达的蛋白，那么为什么要诱导呢？又为什么不能闲置呢？...

你转化后，被转化的基因也就认为是菌体的基因了，所以，只要是能被表达的蛋白，就能算是总蛋白。
而且，这是你转化的基因还是与菌体本身自有的基因还是不同的，所以，通过诱导来表达。
个人观点啊，参考下。
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4楼2012-08-17 12:14:57
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consist10

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by dshlove at 2012-08-17 12:14:57
你转化后，被转化的基因也就认为是菌体的基因了，所以，只要是能被表达的蛋白，就能算是总蛋白。
而且，这是你转化的基因还是与菌体本身自有的基因还是不同的，所以，通过诱导来表达。
个人观点啊，参考下。...

谢谢
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5楼2012-08-17 13:29:08
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