应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » Western blot 有没有大仙做过Cleaved caspase-3(17kD),求操作经验啊！
121/2返回列表12下一页
查看: 4473  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

神经再生

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] Western blot 有没有大仙做过Cleaved caspase-3(17kD),求操作经验啊！

Western blot 有没有大仙做过Cleaved caspase-3(17kD),求心得，求经验！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
也许似乎大概是，然而未必不见得。
1楼 2012-08-15 10:22:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

豆龟

新虫 (初入文坛)
楼主现在做的进展如何呢？我现在也是打算做斑马鱼蛋白的caspase 3的WB，之前用abcam的抗体做了，但没有出条带，请问你用的哪家的抗体？
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2012-11-28 12:00:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

zjutheone

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
神经再生: 金币+10, ★★★很有帮助, 不错！ 2012-10-10 22:22:47
常规操作，胶用12%是没问题的，30微克的上样量，100V，湿转1小时就可以了。
western时，测定cleaved caspase-3，total caspase-3和β-actin都要做。
赞一下 回复此楼
2楼2012-10-09 17:16:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

15929819216

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★
看天: 金币+3, 新 鼓励 常来 2012-10-12 14:25:56
请问一下，你用什么仪器，是Bio-Red 吗，你100V恒压转时，电流是多大的，敬待回音。。。
赞一下 回复此楼
3楼2012-10-12 13:35:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

david0308

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
神经再生: 金币+5 2013-04-05 11:14:00
一般来说你的分子量较小，可以考虑一下小分子胶。如果不会的话其实12%或者15%的胶也可以，90V15min后再120V不超过一个小时，转膜的时候横流两个小时就好，然后膜要用0.2um孔径的，别用0.45的，要不可能会转出去。
赞一下 回复此楼
哈哈
4楼2012-10-16 20:30:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

15929819216

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
神经再生: 金币+5 2013-04-05 11:13:45
我们是bio-red湿转，一个小时十分钟，由转出来的，但重复不出来了，可以试试，恒流200mA,有好的建议的请回复，
赞一下 回复此楼
5楼2012-11-15 16:55:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

豆龟

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zjutheone at 2012-10-09 17:16:31
常规操作，胶用12%是没问题的，30微克的上样量，100V，湿转1小时就可以了。
western时，测定cleaved caspase-3，total caspase-3和β-actin都要做。

请问您用的是哪家的caspase 3抗体呢
赞一下 回复此楼
6楼2012-11-28 11:58:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

神经再生

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 豆龟 at 2012-11-28 12:00:21
楼主现在做的进展如何呢？我现在也是打算做斑马鱼蛋白的caspase 3的WB，之前用abcam的抗体做了，但没有出条带，请问你用的哪家的抗体？

cells signal现在能做的出来，但是偶尔会出很不好看的条带，很惆怅
15%胶电泳，湿转100V100min-2h都是可以的
赞一下 回复此楼
也许似乎大概是，然而未必不见得。
8楼2012-11-29 12:32:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

乖乖宝贝

金虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 神经再生 at 2012-11-29 12:32:40
cells signal现在能做的出来，但是偶尔会出很不好看的条带，很惆怅
15%胶电泳，湿转100V100min-2h都是可以的...

我想问下，湿转100V,100min ,做出来的是17KD一个条带，还是35和17一起出来了。同时想问下，出现Pro cleaved caspase-3  与药物作用的时间有关系吗？最近我也在做，35KD很容易就出条带了，但是17KD的老是出不来。
赞一下 回复此楼
尽自己最大的努力，优秀毕业！
9楼2013-02-19 14:06:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

神经再生

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 乖乖宝贝 at 2013-02-19 14:06:18
我想问下，湿转100V,100min ,做出来的是17KD一个条带，还是35和17一起出来了。同时想问下，出现Pro cleaved caspase-3  与药物作用的时间有关系吗？最近我也在做，35KD很容易就出条带了，但是17KD的老是出不来。...

35kD处的条带应该是Pro-caspase-3，即caspase-3前体分子。它在实验中不会有明显的变化，一般都会作为参考的。（出现这个条带应该是抗体的原因）
17kD的cleave caspase-3实在不是太好做，我现在就是用的100V,100min 进行湿转，是有条带出现的。不知道你的蛋白浓度多少，增加上样量试试吧。
赞一下 回复此楼
也许似乎大概是，然而未必不见得。
10楼2013-02-20 08:41:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 神经再生 的主题更新
121/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 电气专硕320求调剂 +6 小麻子111 2026-04-10 6/300 2026-04-12 10:54 by lemon6009
[考研] 271求调剂 +20 2261744733 2026-04-11 22/1100 2026-04-11 23:14 by labixiaoqiao
[考研] 293求调剂 +8 勇远库爱314 2026-04-06 8/400 2026-04-11 20:25 by 蓝云思雨
[考研] 085600材料与化工329分求调剂 +16 叶zilin 2026-04-10 16/800 2026-04-11 11:04 by may_新宇
[考研] 化工求调剂！ +35 RichLi_ 2026-04-06 35/1750 2026-04-11 11:02 by zhq0425
[考研] 287求调剂 +15 Fnhc 2026-04-07 21/1050 2026-04-10 19:09 by chemisry
[考研] 085404 298分求调剂 +10 呼啦呼啦呼呼呼 2026-04-10 11/550 2026-04-10 16:44 by wangy0907
[基金申请] 有爆料，一个青年教师卖房得400万，然后换了一个四青帽子 +9 babu2015 2026-04-08 9/450 2026-04-10 11:43 by 苏东坡二世
[考研] 296求调剂 +6 汪！？！ 2026-04-08 6/300 2026-04-10 11:02 by mattzhming
[考研] 材料专硕调剂 +16 哈哈哈吼吼吼哈 2026-04-07 17/850 2026-04-09 21:16 by wutongshun
[考研] 322求调剂，08工科 +3 今天是个小号 2026-04-08 3/150 2026-04-09 15:53 by wp06
[考研] 265求调剂 +4 风说她早忘了 2026-04-07 4/200 2026-04-09 13:59 by only周
[考研] 求调剂 +13 柒luck 2026-04-07 13/650 2026-04-08 22:46 by 猪会飞
[考研] 266调剂 +8 daya sun 2026-04-07 9/450 2026-04-08 20:27 by yutian743
[考研] 336求调剂，一志愿中科大 +9 墨彧 yuyu 2026-04-06 9/450 2026-04-08 11:24 by 想读书的菌菌
[考研] 求调剂 +15 熊二想上岸 2026-04-06 15/750 2026-04-08 04:53 by 无际的草原
[考研] 调剂求助（生物与医药） +6 @6952 2026-04-06 6/300 2026-04-07 23:52 by lys0704
[考研] 材料工程专业日语生求调剂 +9 111623 2026-04-07 9/450 2026-04-07 23:31 by 一只好果子?
[考研] 297分083200求助 +9 aekx 2026-04-05 9/450 2026-04-06 20:57 by flysky1234
[考研] 材料调剂 +5 小刘同学吖吖 2026-04-06 5/250 2026-04-06 18:34 by sherry_1901
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭