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神经再生

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] Western blot 有没有大仙做过Cleaved caspase-3(17kD),求操作经验啊!

Western blot 有没有大仙做过Cleaved caspase-3(17kD),求心得,求经验!
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也许似乎大概是,然而未必不见得。
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神经再生

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 豆龟 at 2012-11-28 12:00:21
楼主现在做的进展如何呢?我现在也是打算做斑马鱼蛋白的caspase 3的WB,之前用abcam的抗体做了,但没有出条带,请问你用的哪家的抗体?

cells signal现在能做的出来,但是偶尔会出很不好看的条带,很惆怅
15%胶电泳,湿转100V100min-2h都是可以的
也许似乎大概是,然而未必不见得。
8楼2012-11-29 12:32:40
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zjutheone

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
神经再生: 金币+10, ★★★很有帮助, 不错! 2012-10-10 22:22:47
常规操作,胶用12%是没问题的,30微克的上样量,100V,湿转1小时就可以了。
western时,测定cleaved caspase-3,total caspase-3和β-actin都要做。
2楼2012-10-09 17:16:31
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15929819216

新虫 (初入文坛)

★ ★ ★
看天: 金币+3, 新 鼓励 常来 2012-10-12 14:25:56
请问一下,你用什么仪器,是Bio-Red 吗,你100V恒压转时,电流是多大的,敬待回音。。。
3楼2012-10-12 13:35:46
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david0308

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
神经再生: 金币+5 2013-04-05 11:14:00
一般来说你的分子量较小,可以考虑一下小分子胶。如果不会的话其实12%或者15%的胶也可以,90V15min后再120V不超过一个小时,转膜的时候横流两个小时就好,然后膜要用0.2um孔径的,别用0.45的,要不可能会转出去。
哈哈
4楼2012-10-16 20:30:35
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