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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 急，请大家帮帮忙，可以室温沉淀RNA吗？
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lmcyjxs

金虫 (正式写手)

[求助] 急，请大家帮帮忙，可以室温沉淀RNA吗？

问题如题，我前天用CTAB法提RNA，抽提溶液自制，LiCL沉淀RNA -20℃冰箱沉淀4小时后无沉淀，我觉得是失败了（其实也可能没，只是当时我不知道RNA是无色胶状的沉淀，以为是肉眼清晰可见的白色沉淀，查了资料才知道可能是这样的）就想不要了，后放于室温，过了两天，发现有白色絮状沉淀了，先又放回了-20℃冰箱冻着。
   现在我想问，这些可能是RNA吗？RNA的沉淀都是无色胶状的吗？
   请各位高手指点，小妹初次接触这行，已经提过两次了，都是一样的情况，心里面好失落啊！眼看整个暑假就差不多过去了，俺还不能回家，没做成绩出来的话，还怎么混啊
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思路决定出路。。。
1楼 2012-08-06 08:47:58
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涌动的泉

铜虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流经验 2012-08-06 15:10:57
lmcyjxs: 金币+2, ★有帮助 2012-08-07 22:20:33
RNA是很容易降解的，如果室温放了两天估计都降解完了
建议重做一遍
然后跑一下琼脂糖凝胶，总RNA跑完胶如果是三条带，而且5S比较模糊的话说明质量还不错啊，实在不放心的话可以用核酸定量仪测一下
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我们的过去，成就了如今的我们，无需悔恨
2楼2012-08-06 09:39:56
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残笙

木虫 (正式写手)
我也在提RNA，提出之后最好立刻放入-80℃冰箱。加LiCl沉淀之后，用75%乙醇洗脱，再用DEPC-H2O溶解，然后做个电泳检测，看降解情况。你要是看到白色沉淀，基本上就不能用了。
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3楼2012-08-06 11:30:21
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lmcyjxs

金虫 (正式写手)
lmcyjxs: 回帖置顶 2012-08-08 10:32:46
引用回帖:
3楼: Originally posted by 残笙 at 2012-08-06 11:30:21
我也在提RNA，提出之后最好立刻放入-80℃冰箱。加LiCl沉淀之后，用75%乙醇洗脱，再用DEPC-H2O溶解，然后做个电泳检测，看降解情况。你要是看到白色沉淀，基本上就不能用了。

能否继续请教一下一些细节问题？
1、溶液的配制，用于提RNA的tris溶液你是用DEPC灭菌水配的吗？还是直接去离子水配的？这些用来装各溶液的瓶子你有没有用DEPC水浸泡过？
2、那些tips和离心管我只用了高压高温灭菌，没有用DEPC水浸泡过，这样会很影响实验吗？你在做实验的时候有用DEPC水泡过吗？
3、配制CTAB-tris溶液时，里面一些试剂的添加入顺序有影响吗？
4、你看到的RNA沉淀是什么样的呢？不是无色透明的胶状沉淀吗？
5、提RNA的时候，你觉得最关键的步骤在于哪里？

我初次接触这些，提过3次了，都感觉看不到沉淀，也不知道是不是试剂的问题，还是操作的问题。。。对于以上问题，很希望可以交流交流！谢谢啦
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思路决定出路。。。
4楼2012-08-07 22:48:29
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lmcyjxs: 金币+2, ★有帮助 2012-08-08 00:36:23
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-08-08 14:24:55
如果是放-20度冰箱问题不大，楼主先溶解后测个浓度，跑个胶看下质量再说。我的RNA就是放在-20度的，不过是溶解后放的，完全没有问题，1，2个月之后测浓度，和最开始没有差异，跑胶看质量也非常好。
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5楼2012-08-08 00:02:06
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lmcyjxs

金虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by chenguestc at 2012-08-08 00:02:06
如果是放-20度冰箱问题不大，楼主先溶解后测个浓度，跑个胶看下质量再说。我的RNA就是放在-20度的，不过是溶解后放的，完全没有问题，1，2个月之后测浓度，和最开始没有差异，跑胶看质量也非常好。

真好，谢谢
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思路决定出路。。。
6楼2012-08-08 00:34:43
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