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lmcyjxs

金虫 (正式写手)

[求助] 急,请大家帮帮忙,可以室温沉淀RNA吗?

问题如题,我前天用CTAB法提RNA,抽提溶液自制,LiCL沉淀RNA -20℃冰箱沉淀4小时后无沉淀,我觉得是失败了(其实也可能没,只是当时我不知道RNA是无色胶状的沉淀,以为是肉眼清晰可见的白色沉淀,查了资料才知道可能是这样的)就想不要了,后放于室温,过了两天,发现有白色絮状沉淀了,先又放回了-20℃冰箱冻着。
   现在我想问,这些可能是RNA吗?RNA的沉淀都是无色胶状的吗?
   请各位高手指点,小妹初次接触这行,已经提过两次了,都是一样的情况,心里面好失落啊!眼看整个暑假就差不多过去了,俺还不能回家,没做成绩出来的话,还怎么混啊
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思路决定出路。。。
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残笙

木虫 (正式写手)

我也在提RNA,提出之后最好立刻放入-80℃冰箱。加LiCl沉淀之后,用75%乙醇洗脱,再用DEPC-H2O溶解,然后做个电泳检测,看降解情况。你要是看到白色沉淀,基本上就不能用了。
3楼2012-08-06 11:30:21
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涌动的泉

铜虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流经验 2012-08-06 15:10:57
lmcyjxs: 金币+2, 有帮助 2012-08-07 22:20:33
RNA是很容易降解的,如果室温放了两天估计都降解完了
建议重做一遍
然后跑一下琼脂糖凝胶,总RNA跑完胶如果是三条带,而且5S比较模糊的话说明质量还不错啊,实在不放心的话可以用核酸定量仪测一下
我们的过去,成就了如今的我们,无需悔恨
2楼2012-08-06 09:39:56
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lmcyjxs

金虫 (正式写手)

lmcyjxs: 回帖置顶 2012-08-08 10:32:46
引用回帖:
3楼: Originally posted by 残笙 at 2012-08-06 11:30:21
我也在提RNA,提出之后最好立刻放入-80℃冰箱。加LiCl沉淀之后,用75%乙醇洗脱,再用DEPC-H2O溶解,然后做个电泳检测,看降解情况。你要是看到白色沉淀,基本上就不能用了。

能否继续请教一下一些细节问题?
1、溶液的配制,用于提RNA的tris溶液你是用DEPC灭菌水配的吗?还是直接去离子水配的?这些用来装各溶液的瓶子你有没有用DEPC水浸泡过?
2、那些tips和离心管我只用了高压高温灭菌,没有用DEPC水浸泡过,这样会很影响实验吗?你在做实验的时候有用DEPC水泡过吗?
3、配制CTAB-tris溶液时,里面一些试剂的添加入顺序有影响吗?
4、你看到的RNA沉淀是什么样的呢?不是无色透明的胶状沉淀吗?
5、提RNA的时候,你觉得最关键的步骤在于哪里?

我初次接触这些,提过3次了,都感觉看不到沉淀,也不知道是不是试剂的问题,还是操作的问题。。。对于以上问题,很希望可以交流交流!谢谢啦
思路决定出路。。。
4楼2012-08-07 22:48:29
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
lmcyjxs: 金币+2, 有帮助 2012-08-08 00:36:23
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-08-08 14:24:55
如果是放-20度冰箱问题不大,楼主先溶解后测个浓度,跑个胶看下质量再说。我的RNA就是放在-20度的,不过是溶解后放的,完全没有问题,1,2个月之后测浓度,和最开始没有差异,跑胶看质量也非常好。
5楼2012-08-08 00:02:06
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