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bonbonzd

木虫 (小有名气)

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[交流] 基因敲入，同源重组已有3人参与

大家好，最近接触同源重组，想把一段基因，利用在同源重组技术，将其插入到受体菌染色体中。有一些疑惑的地方，还望高手赐教。
1，构建同源重组打靶载体，有什么要求，必须要以自杀性质粒为骨架吗？
2，我要插入的基因片段为4Kb多，对于这么大的片段，同源重组技术能实现吗？

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1楼2012-08-04 16:49:27

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xbl3688

银虫 (正式写手)

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★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-08-08 14:28:42

引用回帖:

7楼: Originally posted by bonbonzd at 2012-08-08 00:09:02
谢谢你的解答，可是如果不加入筛选标记，怎么去鉴别同源重组成功？还有我想利用双交换，第一次将外源目的基因和抗性标记等序列都插入受体菌染色体，然后第二次交换把抗性基因等在脱落只留下外源目的基因，那么只是 ...

同源交换是概率事件，是在传代过程中发生的。只导入片段成功率应该很低，还是考虑转重组质粒吧。
假设是“同源序列-目的基因-筛选标记-同源序列”这样的序列重组到了染色体上，如果质粒不能缺失，用抗生素筛选到的就不知是真是假了。只是个人想法。好运！