应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 基因敲入，同源重组
51/1返回列表
查看: 3982  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

bonbonzd

木虫 (小有名气)

[交流] 基因敲入，同源重组 已有3人参与

大家好，最近接触同源重组，想把一段基因，利用在同源重组技术，将其插入到受体菌染色体中。有一些疑惑的地方，还望高手赐教。
1，构建同源重组打靶载体，有什么要求，必须要以自杀性质粒为骨架吗？
2，我要插入的基因片段为4Kb多，对于这么大的片段，同源重组技术能实现吗？
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

分子生化实验经验积累

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-08-04 16:49:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xbl3688

银虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-08-08 14:28:42
引用回帖:
7楼: Originally posted by bonbonzd at 2012-08-08 00:09:02
谢谢你的解答，可是如果不加入筛选标记，怎么去鉴别同源重组成功？还有我想利用双交换，第一次将外源目的基因和抗性标记等序列都插入受体菌染色体，然后第二次交换把抗性基因等在脱落只留下外源目的基因，那么只是 ...

同源交换是概率事件，是在传代过程中发生的。只导入片段成功率应该很低，还是考虑转重组质粒吧。
    假设是“同源序列-目的基因-筛选标记-同源序列”这样的序列重组到了染色体上，如果质粒不能缺失，用抗生素筛选到的就不知是真是假了。 只是个人想法。好运！
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

bonbonzd
生活的乐趣在于善于发现美，学会欣赏美
8楼2012-08-08 10:18:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

bonbonzd

木虫 (小有名气)
还有可不可以不构建打靶载体，直接将含有插入位点同源序列的目的基因片段，转到受体细胞内，完成同源重组，基因敲入
赞一下 回复此楼
2楼2012-08-04 17:19:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

robert-RBT

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
可以不用构建载体，直接用同源序列和筛选标记导入菌株。4kb应该没有问题。真菌中还有更大想序列也成功的。一般同源序适当延长，有助于基因敲除。
赞一下 回复此楼
3楼2012-08-04 21:10:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bonbonzd

木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by robert-RBT at 2012-08-04 21:10:39
可以不用构建载体，直接用同源序列和筛选标记导入菌株。4kb应该没有问题。真菌中还有更大想序列也成功的。一般同源序适当延长，有助于基因敲除。

谢谢！我做的是基因敲入，是同源序列-目的基因-筛选标记-同源序列这样的一个片段导入细胞吗？
赞一下 回复此楼
4楼2012-08-04 23:50:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 085600 材料与化工 329分求调剂 +8 Mr. Z 2026-03-25 8/400 2026-03-25 23:00 by peike
[考研] 086000生物与医药292求调剂 +4 小小陈小小 2026-03-22 7/350 2026-03-25 19:07 by 星空星月
[考研] 0854AI CV方向招收调剂 +4 章小鱼567 2026-03-23 4/200 2026-03-25 17:04 by CoderLoser
[考研] 求调剂 +3 李李不服输 2026-03-25 3/150 2026-03-25 13:03 by cmz0325
[考研] 359求调剂 +3 王了个楠 2026-03-25 3/150 2026-03-25 12:50 by Dyhoer
[考研] 一志愿吉林大学材料与化工303分求调剂 +4 为学666 2026-03-24 4/200 2026-03-25 11:27 by BruceLiu320
[考研] 生物学学硕求调剂 +7 小羊睡着了? 2026-03-23 10/500 2026-03-25 02:24 by 清风拂扬。 m
[考研] 材料专硕找调剂 +5 哈哈哈吼吼吼哈 2026-03-23 5/250 2026-03-24 19:07 by 了了了了。。
[考研] 求调剂一志愿武汉理工大学材料工程（085601） +5 WW.' 2026-03-23 7/350 2026-03-24 14:50 by sprinining
[考研] 284求调剂 +3 yanzhixue111 2026-03-23 6/300 2026-03-23 22:58 by pswait
[考研] 350求调剂 +6 weudhdk 2026-03-19 6/300 2026-03-23 15:47 by tangyuan0840221
[考研] 寻找调剂 +4 倔强芒? 2026-03-21 4/200 2026-03-22 16:14 by 木托莫露露
[考研] 269专硕求调剂 +6 金恩贝 2026-03-21 6/300 2026-03-22 14:31 by ColorlessPI
[考研] 材料学硕301分求调剂 +7 Liyouyumairs 2026-03-21 7/350 2026-03-21 22:31 by peike
[考研] 336求调剂 +5 rmc8866 2026-03-21 5/250 2026-03-21 17:24 by 学员8dgXkO
[考研] 22 350 本科985求调剂，求老登收留 +3 李轶男003 2026-03-20 3/150 2026-03-21 13:28 by 搏击518
[考研] 一志愿南昌大学，327分，材料与化工085600 +9 Ncdx123456 2026-03-19 9/450 2026-03-20 23:41 by lovewei0727
[考研] 329求调剂 +9 想上学吖吖 2026-03-19 9/450 2026-03-20 22:01 by luoyongfeng
[考研] 295复试调剂 +8 简木ChuFront 2026-03-19 8/400 2026-03-20 20:44 by zhukairuo
[考研] 一志愿西安交通大学 学硕 354求调剂211或者双一流 +3 我想要读研究生 2026-03-20 3/150 2026-03-20 20:13 by JourneyLucky
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭