24小时热门版块排行榜    

查看: 3976  |  回复: 10
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

bonbonzd

木虫 (小有名气)

[交流] 基因敲入,同源重组 已有3人参与

大家好,最近接触同源重组,想把一段基因,利用在同源重组技术,将其插入到受体菌染色体中。有一些疑惑的地方,还望高手赐教。
1,构建同源重组打靶载体,有什么要求,必须要以自杀性质粒为骨架吗?
2,我要插入的基因片段为4Kb多,对于这么大的片段,同源重组技术能实现吗?
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

分子生化实验经验积累

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bonbonzd

木虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by robert-RBT at 2012-08-04 21:10:39
可以不用构建载体,直接用同源序列和筛选标记导入菌株。4kb应该没有问题。真菌中还有更大想序列也成功的。一般同源序适当延长,有助于基因敲除。

谢谢!我做的是基因敲入,是同源序列-目的基因-筛选标记-同源序列这样的一个片段导入细胞吗?
4楼2012-08-04 23:50:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

bonbonzd

木虫 (小有名气)

还有可不可以不构建打靶载体,直接将含有插入位点同源序列的目的基因片段,转到受体细胞内,完成同源重组,基因敲入
2楼2012-08-04 17:19:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

robert-RBT

木虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
可以不用构建载体,直接用同源序列和筛选标记导入菌株。4kb应该没有问题。真菌中还有更大想序列也成功的。一般同源序适当延长,有助于基因敲除。
3楼2012-08-04 21:10:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

robert-RBT

木虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by bonbonzd at 2012-08-04 23:50:55
谢谢!我做的是基因敲入,是同源序列-目的基因-筛选标记-同源序列这样的一个片段导入细胞吗?...

可以,除了有致死效应的序列外,理论上可以在任何位置导入目的序列。
5楼2012-08-05 01:15:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0854电子信息求调剂 +7 α____ 2026-03-22 9/450 2026-03-25 13:37 by α____
[考研] 求调剂 +3 李李不服输 2026-03-25 3/150 2026-03-25 13:03 by cmz0325
[考研] 359求调剂 +3 王了个楠 2026-03-25 3/150 2026-03-25 12:50 by Dyhoer
[考研] 299求调剂 +7 shxchem 2026-03-20 9/450 2026-03-25 10:41 by lbsjt
[考研] 材料专硕找调剂 +5 哈哈哈吼吼吼哈 2026-03-23 5/250 2026-03-24 19:07 by 了了了了。。
[考研] 招08考数学 +7 laoshidan 2026-03-20 16/800 2026-03-24 17:52 by 乌拉儿山脉
[考研] 291求调剂 +3 HanBeiNingZC 2026-03-24 3/150 2026-03-24 16:34 by barlinike
[考研] 300求调剂,材料科学英一数二 +5 leaflight 2026-03-24 5/250 2026-03-24 16:25 by laoshidan
[考研] 材料专硕331求调剂 +4 鲜当牛 2026-03-24 4/200 2026-03-24 15:58 by JourneyLucky
[考研] 276求调剂。有半年电池和半年高分子实习经历 +9 材料学257求调剂 2026-03-23 10/500 2026-03-24 07:36 by wangy0907
[考研] 335求调剂 +4 yuyu宇 2026-03-23 5/250 2026-03-23 23:49 by Txy@872106
[考研] 求调剂 +7 十三加油 2026-03-21 7/350 2026-03-23 23:48 by 热情沙漠
[考研] 求调剂材料学硕080500,总分289分 5+3 @taotao 2026-03-19 21/1050 2026-03-23 10:17 by 冠c哥
[考研] 一志愿东华大学控制学硕320求调剂 +3 Grand777 2026-03-21 3/150 2026-03-21 19:23 by 简之-
[考研] 0703化学调剂 +4 妮妮ninicgb 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:39 by 学员8dgXkO
[考研] 22408 344分 求调剂 一志愿 华电计算机技术 +4 solanXXX 2026-03-20 4/200 2026-03-20 23:49 by alg094825
[考研] 中南大学化学学硕337求调剂 +3 niko- 2026-03-19 6/300 2026-03-20 21:58 by luoyongfeng
[考研] 295材料求调剂,一志愿武汉理工085601专硕 +5 Charlieyq 2026-03-19 5/250 2026-03-20 20:35 by JourneyLucky
[考研] 086500 325 求调剂 +3 领带小熊 2026-03-19 3/150 2026-03-20 18:38 by 尽舜尧1
[考研] 0856调剂,是学校就去 +8 sllhht 2026-03-19 9/450 2026-03-20 14:25 by 无懈可击111
信息提示
请填处理意见