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幸福守候

新虫 (初入文坛)

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专业: 免疫相关疾病其他科学问题

[求助] 蛋白诱导纯化

我做的重组大肠杆菌的诱导表达纯化蛋白收集的蛋白在用镍柱纯化后跑电泳进行检测只有破碎液和过柱之后收集的样品中出现的目的蛋白后面冲洗和洗脱什么都没有之前做的相同的条件可以跑出来目的蛋白的条带的想请教一下是不是我的柱子挂不上蛋白了什么情况下表明柱子挂不上蛋白

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1楼 2012-08-04 15:26:55

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xbl3688

银虫 (正式写手)

应助: 12 (小学生)
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性别: GG
专业: 生物大分子结构与功能

【答案】应助回帖

破碎上清里有蛋白，说明不是因为包涵体（包涵体在离心后一般在沉淀中）；
过柱后流出的穿透液包含目的蛋白，而washing和elution步骤都没有蛋白，我理解没错吧。我觉得可能有几个原因：一，镍柱没有充电或没有充好电（在上样前加Ni2+），导致组氨酸标签挂不到柱子上；二，柱子出现问题，破了或是怎样，上的样品都流失了（这种可能比较小，如果漏了填料也会没了的）；三，设计载体上组氨酸标签出了问题。
一个个排除试试吧。

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生活的乐趣在于善于发现美，学会欣赏美

3楼2012-08-14 09:35:36

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lxh502976898

金虫 (小有名气)

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性别: GG
专业: 药理学其他科学问题

你的破碎液里有目的蛋白说明是形成包涵体，目的蛋白应该先挂在柱子上然后洗脱出现峰你接管就是了我没看懂你说的过柱后能收集到样品是什么意思

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2楼2012-08-13 15:00:40

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