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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » SDS-PAGE蛋白胶咨询
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dhmdddd

木虫 (正式写手)

[求助] SDS-PAGE蛋白胶咨询

一个蛋白胶让实验室的人都崩溃了……样品攒了N多，蛋白胶做了一周还是没有做好……先说下配置蛋白胶的试剂吧，AC浓度是30%，这个是买的，分离胶和浓缩胶的TRIS-HCL，10%SDS，都是新配置的。之前胶是凝的比较慢，可能是因为我们的过硫酸铵受潮了，影响，然后我们每次都是加大过硫酸铵和TEMED的添加量，胶还好，能跑。最近一周做胶就是下午做好胶，放在水里，第二天就会变成图片中的样子……里面白色是颗粒状的东西，像盐粒，分离胶应该是有一定的硬度，比较脆一点，可是这样的分离胶出来很软，和浓缩胶有点像，甚至比浓缩胶更软……大家说这个只是因为过硫酸铵的问题吗？之前也是用的这个过硫酸铵，添加量加倍的话是可以的，怎么现在会是这个样子？请给位高手指教，谢谢~~

白色的东西就是像盐粒一样的东西
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上班族，学习ing……
1楼 2012-08-02 21:01:52
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ankang0910

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
dhmdddd: 金币+1 2012-08-03 11:35:05
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-10-27 15:50:47
TRIS-HCL的pH值配的对吗？过硫酸铵如果有问题应该影响丙烯酰胺的交联，胶的凝固。有颗粒是不是什么试剂没溶好？不行就制好胶就马上跑胶。不要放水里过夜。
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实验顺利！！
2楼2012-08-03 10:31:46
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robert-RBT

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-08-03 13:58:55
没有遇到过这样情况，可能是AP的问题。为防止AP受潮，可以一次配好分装冻存在-20度，其它固体试剂要密封低温保存。TMED也不宜过量，会影响胶的交联和韧性。配好的胶，可以用保鲜膜封好后放于4度，最好不要长时间放于水中。
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dhmdddd
3楼2012-08-03 10:47:56
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
dhmdddd: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-08-03 11:42:10
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助，积极解答问题 2012-08-03 13:59:12
dhmdddd: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-08-04 13:08:28
APS现配现用最好，或者一次配置分装保存于-20度备用。
胶现配现用。TEMED和APS就按照标准量加即可，稍微多一点也是可以的，太多容易造成烧胶。
如果找不到原因，最好的办法就是把所有的试剂全部换新的，这样是最快的解决问题的办法，我们原来也遇到过类似问题，找了很长时间几乎所有试剂都换找原因，其实还不如一次解决，全新的就OK了。
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4楼2012-08-03 11:09:36
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dhmdddd

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by chenguestc at 2012-08-03 11:09:36
APS现配现用最好，或者一次配置分装保存于-20度备用。
胶现配现用。TEMED和APS就按照标准量加即可，稍微多一点也是可以的，太多容易造成烧胶。
如果找不到原因，最好的办法就是把所有的试剂全部换新的，这样是最快 ...

什么事烧胶？我们的APS新的还没有到，别的试剂都已经是新的了。TEMED和APS加的量是挺多的，加少了胶不凝……等APS过来了再重新做胶试试看。
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上班族，学习ing……
5楼2012-08-03 11:32:10
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dhmdddd

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ankang0910 at 2012-08-03 10:31:46
TRIS-HCL的pH值配的对吗？过硫酸铵如果有问题应该影响丙烯酰胺的交联，胶的凝固。有颗粒是不是什么试剂没溶好？不行就制好胶就马上跑胶。不要放水里过夜。

TRIS-HCL盐酸的pH是对的，颗粒这个东西也说不清楚到底是什么东西，昨天也试了一下做好胶就马上跑，胶很软，韧性倒还好，结果蛋白条带全部都挤到一起了，marker也没有分开……
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上班族，学习ing……
6楼2012-08-03 11:35:00
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dhmdddd

木虫 (正式写手)
送鲜花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by robert-RBT at 2012-08-03 10:47:56
没有遇到过这样情况，可能是AP的问题。为防止AP受潮，可以一次配好分装冻存在-20度，其它固体试剂要密封低温保存。TMED也不宜过量，会影响胶的交联和韧性。配好的胶，可以用保鲜膜封好后放于4度，最好不要长时间放于 ...

恩，原来的使用是现用现配，结果造成APS受潮，以后新买的及要改变使用方法了，谢谢你~
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上班族，学习ing……
7楼2012-08-03 11:36:39
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
dhmdddd: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-08-03 12:46:02
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-10-27 15:51:06
引用回帖:
5楼: Originally posted by dhmdddd at 2012-08-03 11:32:10
什么事烧胶？我们的APS新的还没有到，别的试剂都已经是新的了。TEMED和APS加的量是挺多的，加少了胶不凝……等APS过来了再重新做胶试试看。...

加多了TEMED和APS造成胶凹凸不平下胶后不是平展的而是绉把的跑出的带还容易变形的现象就是烧胶了。
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8楼2012-08-03 12:25:40
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tiani_tan

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
dhmdddd: 金币+1 2012-08-04 13:08:15
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-10-27 15:51:16
一般情况下ＡＰ是现配现用的，其他试剂４度保存的。如果还配不好的话，可以试试预制胶，挺便宜的。重复性好
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9楼2012-08-03 13:06:17
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mamadexiao

木虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by tiani_tan at 2012-08-03 13:06:17
一般情况下ＡＰ是现配现用的，其他试剂４度保存的。如果还配不好的话，可以试试预制胶，挺便宜的。重复性好

有推荐的预制胶的公司么
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10楼2012-10-18 23:21:42
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