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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » SDS-PAGE蛋白胶咨询
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dhmdddd

木虫 (正式写手)

[求助] SDS-PAGE蛋白胶咨询

一个蛋白胶让实验室的人都崩溃了……样品攒了N多，蛋白胶做了一周还是没有做好……先说下配置蛋白胶的试剂吧，AC浓度是30%，这个是买的，分离胶和浓缩胶的TRIS-HCL，10%SDS，都是新配置的。之前胶是凝的比较慢，可能是因为我们的过硫酸铵受潮了，影响，然后我们每次都是加大过硫酸铵和TEMED的添加量，胶还好，能跑。最近一周做胶就是下午做好胶，放在水里，第二天就会变成图片中的样子……里面白色是颗粒状的东西，像盐粒，分离胶应该是有一定的硬度，比较脆一点，可是这样的分离胶出来很软，和浓缩胶有点像，甚至比浓缩胶更软……大家说这个只是因为过硫酸铵的问题吗？之前也是用的这个过硫酸铵，添加量加倍的话是可以的，怎么现在会是这个样子？请给位高手指教，谢谢~~

白色的东西就是像盐粒一样的东西
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上班族，学习ing……
1楼 2012-08-02 21:01:52
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dhmdddd

木虫 (正式写手)
送鲜花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by robert-RBT at 2012-08-03 10:47:56
没有遇到过这样情况，可能是AP的问题。为防止AP受潮，可以一次配好分装冻存在-20度，其它固体试剂要密封低温保存。TMED也不宜过量，会影响胶的交联和韧性。配好的胶，可以用保鲜膜封好后放于4度，最好不要长时间放于 ...

恩，原来的使用是现用现配，结果造成APS受潮，以后新买的及要改变使用方法了，谢谢你~
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上班族，学习ing……
7楼2012-08-03 11:36:39
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ankang0910

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
dhmdddd: 金币+1 2012-08-03 11:35:05
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-10-27 15:50:47
TRIS-HCL的pH值配的对吗？过硫酸铵如果有问题应该影响丙烯酰胺的交联，胶的凝固。有颗粒是不是什么试剂没溶好？不行就制好胶就马上跑胶。不要放水里过夜。
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实验顺利！！
2楼2012-08-03 10:31:46
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robert-RBT

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-08-03 13:58:55
没有遇到过这样情况，可能是AP的问题。为防止AP受潮，可以一次配好分装冻存在-20度，其它固体试剂要密封低温保存。TMED也不宜过量，会影响胶的交联和韧性。配好的胶，可以用保鲜膜封好后放于4度，最好不要长时间放于水中。
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dhmdddd
3楼2012-08-03 10:47:56
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
dhmdddd: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-08-03 11:42:10
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助，积极解答问题 2012-08-03 13:59:12
dhmdddd: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-08-04 13:08:28
APS现配现用最好，或者一次配置分装保存于-20度备用。
胶现配现用。TEMED和APS就按照标准量加即可，稍微多一点也是可以的，太多容易造成烧胶。
如果找不到原因，最好的办法就是把所有的试剂全部换新的，这样是最快的解决问题的办法，我们原来也遇到过类似问题，找了很长时间几乎所有试剂都换找原因，其实还不如一次解决，全新的就OK了。
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4楼2012-08-03 11:09:36
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