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dhmdddd

木虫 (正式写手)

[求助] SDS-PAGE蛋白胶咨询

一个蛋白胶让实验室的人都崩溃了……样品攒了N多,蛋白胶做了一周还是没有做好……先说下配置蛋白胶的试剂吧,AC浓度是30%,这个是买的,分离胶和浓缩胶的TRIS-HCL,10%SDS,都是新配置的。之前胶是凝的比较慢,可能是因为我们的过硫酸铵受潮了,影响,然后我们每次都是加大过硫酸铵和TEMED的添加量,胶还好,能跑。最近一周做胶就是下午做好胶,放在水里,第二天就会变成图片中的样子……里面白色是颗粒状的东西,像盐粒,分离胶应该是有一定的硬度,比较脆一点,可是这样的分离胶出来很软,和浓缩胶有点像,甚至比浓缩胶更软……大家说这个只是因为过硫酸铵的问题吗?之前也是用的这个过硫酸铵,添加量加倍的话是可以的,怎么现在会是这个样子?请给位高手指教,谢谢~~

白色的东西就是像盐粒一样的东西


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上班族,学习ing……
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dhmdddd

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by ankang0910 at 2012-08-03 10:31:46
TRIS-HCL的pH值配的对吗?过硫酸铵如果有问题应该影响丙烯酰胺的交联,胶的凝固。有颗粒是不是什么试剂没溶好?不行就制好胶就马上跑胶。不要放水里过夜。

TRIS-HCL盐酸的pH是对的,颗粒这个东西也说不清楚到底是什么东西,昨天也试了一下做好胶就马上跑,胶很软,韧性倒还好,结果蛋白条带全部都挤到一起了,marker也没有分开……
上班族,学习ing……
6楼2012-08-03 11:35:00
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ankang0910

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
dhmdddd: 金币+1 2012-08-03 11:35:05
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-10-27 15:50:47
TRIS-HCL的pH值配的对吗?过硫酸铵如果有问题应该影响丙烯酰胺的交联,胶的凝固。有颗粒是不是什么试剂没溶好?不行就制好胶就马上跑胶。不要放水里过夜。
实验顺利!!
2楼2012-08-03 10:31:46
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robert-RBT

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-08-03 13:58:55
没有遇到过这样情况,可能是AP的问题。为防止AP受潮,可以一次配好分装冻存在-20度,其它固体试剂要密封低温保存。TMED也不宜过量,会影响胶的交联和韧性。配好的胶,可以用保鲜膜封好后放于4度,最好不要长时间放于水中。

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3楼2012-08-03 10:47:56
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
dhmdddd: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-08-03 11:42:10
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助,积极解答问题 2012-08-03 13:59:12
dhmdddd: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-08-04 13:08:28
APS现配现用最好,或者一次配置分装保存于-20度备用。
胶现配现用。TEMED和APS就按照标准量加即可,稍微多一点也是可以的,太多容易造成烧胶。
如果找不到原因,最好的办法就是把所有的试剂全部换新的,这样是最快的解决问题的办法,我们原来也遇到过类似问题,找了很长时间几乎所有试剂都换找原因,其实还不如一次解决,全新的就OK了。
4楼2012-08-03 11:09:36
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