| 查看: 1827 | 回复: 4 | |||
[求助]
相对定量测基因相对表达量，急啊！！！
|
|
老师要求本人测定水稻抗旱相关的20多个基因的相对表达量，有四个样。太多了，而且样品有限。我没有测扩增效率，直接用双△法测表达量了。内参是用的UBQ5，一个印度人写的。现在遇到很多问题，用的是TAKARA的荧光定量试剂盒， 1、好几个基因CT值都大于35，我提高了模板浓度也不行（我没测RNA浓度，直接测cDNA浓度，然后调成与试剂盒要求的DNA的量来做）。 2、PCR反应过程都按照说明书上设置了，没改改动，循环数40个，因为不太会改。另外用primer5算出的温度，还是用Oligo6算出的温度？因为试剂盒说明书上只给出了Oligo6的温度范围。 3、我跑普通PCR的时候有时候没条带，但跑荧光的时候特异性很好。那是不是没必要跑普通PCR了呢？不过我听其他实验室人说，要先跑梯度PCR，找出最适退火温度，然后再上荧光PCR。 4、有时候有非特异性扩增，提高温度了还不行，是不是要换引物了？ 不好意思，本人新手不太懂，折腾了好几千块钱了，还没出什么结果，很是焦急。求大神指导，不胜感激！！！ |
回复此楼» 猜你喜欢
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有93人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 相对定量荧光PCR结果分析中的SD如何计算？
已经有7人回复
- 荧光定量PCR，是相对定量相关问题请教。
已经有4人回复
- 新基因的克隆和荧光定量表达比较好发的SCI杂志
已经有12人回复
- 请问大家分析抗性基因（或差异表达基因等相关的）的方法有哪些？比如DNA微阵列。。。
已经有10人回复
- 关于基因表达量下调的问题
已经有3人回复
- 酶基因的过表达怎么检测呢
已经有8人回复
- 相对定量PCR求助
已经有16人回复
- 关于我的研究课题：水稻抗病基因的表达研究
已经有4人回复
- 酶基因表达量高，酶活性就一定高吗？（请大家帮帮忙，谢谢）
已经有12人回复
- 相对定量PCR 基线
已经有16人回复
- 荧光定量PCR(相对定量)的分析结果2-△△Ct怎么看呀?
已经有31人回复
- 【求助/交流】RNA的提取问题和qRT-PCR分析基因在不同时间的定量表达
已经有10人回复
宫保鸡丁YZ2楼2012-07-19 17:18:09
3楼2012-07-19 20:50:02
4楼2012-07-20 09:48:28
5楼2012-07-20 10:09:28
