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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 霉菌固体发酵产物提取方法
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haotea430

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1楼 2012-07-13 21:27:35
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jiyannangxj

至尊木虫 (著名写手)

美女搞科研

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
发酵完毕后，直接捣碎琼脂，用等体积乙酸乙酯乙酸乙酯来萃取三次，提取目标产物。能告诉我你做的是哪株真菌吗？具体的名字，能不能共享菌株啊，我做的是植物病原微生物和海洋微生物，可以互换菌株，共同共享怎么样啊……

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2楼2012-07-13 22:46:16
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jiyannangxj

至尊木虫 (著名写手)

美女搞科研

【答案】应助回帖

★
rainwander: 金币+1, 鼓励交流 2012-07-15 09:47:37
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3楼: Originally posted by haotea430 at 2012-07-14 15:23:25
可以的啊，我的是黑茶里的优势真菌，全名叫冠突散囊菌，因形态颜色金黄，因此又叫金花菌。

您说的用乙酸乙酯萃取的话，那琼脂应该不会溶于乙酸乙酯吧，萃取完后直接过滤除去琼脂是么？还有想请教下琼脂都会溶哪 ...

琼脂不会溶于乙酸乙酯的，萃取完成后，过滤即可，再说，琼脂会沉底的，很好除去，另外，乙酸乙酯的萃取范围很大，应该会萃到你的目标产物，如果你不放心，乙酸乙酯萃取完后，再用正丁醇或者甲醇萃取，这样的萃取物属于大极性的，乙酸乙酯相是中小极性的……

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4楼2012-07-14 19:07:49
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jiyannangxj

至尊木虫 (著名写手)

美女搞科研

【答案】应助回帖

★ ★
rainwander: 金币+2, 鼓励交流 2012-07-15 09:47:48
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6楼: Originally posted by haotea430 at 2012-07-14 21:21:28
怎样确定代谢产物是在菌体之内和之外？...

这个问题问的很好哦，第一，捣碎之前你要是不嫌麻烦，刮菌苔也可以，无非是分两份萃取，一份纯菌苔萃取，一份琼脂萃取，个人感觉还是直接萃取吧，我都是这么做的，第二，你的目标产物在菌体内还是外，这个不好说，你必须得做发酵液活性实验，首先少量发酵2L发酵液，过滤或者离心，分离菌体与发酵液，分别用乙酸乙酯萃取，菌体要用丙酮浸泡24h破细胞壁，然后旋干丙酮，得到的水相用乙酸乙酯萃取，分别得到了两种浸膏，取少量浸膏用水溶解，分别测活性，来确定活性目标产物的位置。你能给我寄些你那的菌株吗？多寄几种，我们给你寄海洋真菌好不好啊！共享啊……

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7楼2012-07-14 23:14:12
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jiyannangxj

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美女搞科研

【答案】应助回帖

我又看了一遍你的帖子，必须有一点提醒你，我的方法是研究小分子化合物的，对蛋白质或者长肽链不适合，因为提取中用的有机溶剂会让蛋白质失活，短的多肽还是可以的，所以你首先得对目标产物有一定的了解。至少得知道大致的类型。

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8楼2012-07-14 23:19:00
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jiyannangxj

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9楼: Originally posted by haotea430 at 2012-07-15 11:52:29
恩，说的很详细哦，谢谢！跟你学到不少东西了！
那可不可以告诉我具体的一些操作呢？比如说用什么样的培养基，测活性时怎样摒弃培养基的背景影响，认为是菌的代谢产物的影响而不是培养基的成分（我们一般用的液体 ...

丙酮浸泡破壁，我确实没有测过破壁率，因为我这没有显微镜。这是师姐们的经验。如果你担心破壁率可以再超声啊，有机溶剂配比问题，我们都是纯乙酸乙酯跟发酵液等体积萃取三次，不涉及配比问题啊。我们的海洋真菌主要做抗肿瘤活性，不知道你的真菌做哪些活性呢

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11楼2012-07-15 19:08:08
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jiyannangxj

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美女搞科研
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12楼: Originally posted by 周游1166 at 2012-07-16 09:04:25
我是搞病理真菌的，打算提纯毒素，希望能和你交流。...

欢迎交流，欢迎互换菌株，分享菌株，共同进步。。。。。。
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14楼2012-07-17 00:28:39
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jiyannangxj

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16楼: Originally posted by haotea430 at 2012-07-21 18:03:14
对了，你们做海洋真菌的都是做一系列的分离纯化吧，有做质谱鉴定目标产物的么？
...

何止是质谱，核磁是必须的，解谱，解化合物，这是必须中的必须！！！！！

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17楼2012-07-22 10:53:31
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jiyannangxj

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18楼: Originally posted by haotea430 at 2012-07-26 17:04:12
哦，那你们应该都是经过一系列的分离纯化，像提取、过柱子、分段后经过一系列手段光谱、色谱、质谱等方法来鉴定目标化合物。那像我这样的以真菌固体发酵试验是以一种背景非常清楚且单一的单体来作为真菌代谢的底物 ...

可以啊，不过那只能定性分析，不能最终确定结构的，数据没有说服力，。

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19楼2012-07-26 20:07:53
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