应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » CYP3A5大肠杆菌表达 没有目的蛋白？
61/1返回列表
查看: 913  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

20104226034

银虫 (小有名气)

[求助] CYP3A5大肠杆菌表达 没有目的蛋白？

各位高手能否给予指教！
表达载体：PCW
宿主细菌：DH5α
细菌培养过夜后1:100转移至含有100ug/ml的氨苄抗性的LB培养基中，37度培养3h至OD600为0.6，加入IPTG终浓度为1mM , 25度培养20h，结果发现没有目的蛋白，不知是什么原因？文献中报道要在培养体系中加(0.5 mM 5-aminolevulinic acid, trace salts, and
1 mM thiamine），不知这些东西是否一定要加，各有什么作用呢？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
沐浴阳光，享受生活，天天有个好心情！
1楼 2012-07-11 15:45:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

燕子9883

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
20104226034: 金币+2 2012-07-12 20:44:08
你用DH5α表达蛋白？可以换个表达菌株试试。另外加这些东西的话，文献中说不定会谈到原因的。
赞一下 回复此楼
2楼2012-07-11 22:53:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

燕子9883

铜虫 (初入文坛)
DH5alpha不建议用来表达蛋白。
赞一下 回复此楼
3楼2012-07-11 22:54:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

20104226034

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 燕子9883 at 2012-07-11 22:53:59
你用DH5α表达蛋白？可以换个表达菌株试试。另外加这些东西的话，文献中说不定会谈到原因的。

群殴是根据文献中来选择菌株的，而且文献中也没有交代加这些东西是干什么用的，不过还是谢谢啦
赞一下 回复此楼
沐浴阳光，享受生活，天天有个好心情！
4楼2012-07-12 20:45:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sling15

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
5楼2012-10-21 10:44:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

quxixing

金虫 (正式写手)
楼主：
      我也在做P450蛋白，能否馈赠点pCW质粒呢？
赞一下 回复此楼
6楼2014-02-23 12:04:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 20104226034 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭