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20104226034

银虫 (小有名气)

[求助] CYP3A5大肠杆菌表达 没有目的蛋白?

各位高手能否给予指教!
表达载体:PCW
宿主细菌:DH5α
细菌培养过夜后1:100转移至含有100ug/ml的氨苄抗性的LB培养基中,37度培养3h至OD600为0.6,加入IPTG终浓度为1mM , 25度培养20h,结果发现没有目的蛋白,不知是什么原因?文献中报道要在培养体系中加(0.5 mM 5-aminolevulinic acid, trace salts, and
1 mM thiamine),不知这些东西是否一定要加,各有什么作用呢?
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sling15

禁虫 (正式写手)

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5楼2012-10-21 10:44:43
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查看全部 6 个回答

燕子9883

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
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20104226034: 金币+2 2012-07-12 20:44:08
你用DH5α表达蛋白?可以换个表达菌株试试。另外加这些东西的话,文献中说不定会谈到原因的。
2楼2012-07-11 22:53:59
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燕子9883

铜虫 (初入文坛)

DH5alpha不建议用来表达蛋白。
3楼2012-07-11 22:54:48
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20104226034

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 燕子9883 at 2012-07-11 22:53:59
你用DH5α表达蛋白?可以换个表达菌株试试。另外加这些东西的话,文献中说不定会谈到原因的。

群殴是根据文献中来选择菌株的,而且文献中也没有交代加这些东西是干什么用的,不过还是谢谢啦
沐浴阳光,享受生活,天天有个好心情!
4楼2012-07-12 20:45:30
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