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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » CYP3A5大肠杆菌表达 没有目的蛋白？
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20104226034

银虫 (小有名气)

[求助] CYP3A5大肠杆菌表达 没有目的蛋白？

各位高手能否给予指教！
表达载体：PCW
宿主细菌：DH5α
细菌培养过夜后1:100转移至含有100ug/ml的氨苄抗性的LB培养基中，37度培养3h至OD600为0.6，加入IPTG终浓度为1mM , 25度培养20h，结果发现没有目的蛋白，不知是什么原因？文献中报道要在培养体系中加(0.5 mM 5-aminolevulinic acid, trace salts, and
1 mM thiamine），不知这些东西是否一定要加，各有什么作用呢？
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1楼 2012-07-11 15:45:14
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燕子9883

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
20104226034: 金币+2 2012-07-12 20:44:08
你用DH5α表达蛋白？可以换个表达菌株试试。另外加这些东西的话，文献中说不定会谈到原因的。
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2楼2012-07-11 22:53:59
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燕子9883

铜虫 (初入文坛)
DH5alpha不建议用来表达蛋白。
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3楼2012-07-11 22:54:48
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20104226034

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 燕子9883 at 2012-07-11 22:53:59
你用DH5α表达蛋白？可以换个表达菌株试试。另外加这些东西的话，文献中说不定会谈到原因的。

群殴是根据文献中来选择菌株的，而且文献中也没有交代加这些东西是干什么用的，不过还是谢谢啦
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沐浴阳光，享受生活，天天有个好心情！
4楼2012-07-12 20:45:30
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sling15

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
5楼2012-10-21 10:44:43
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quxixing

金虫 (正式写手)
楼主：
      我也在做P450蛋白，能否馈赠点pCW质粒呢？
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6楼2014-02-23 12:04:28
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