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380665135

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[求助] qPCR引物设计

请问qPCR的引物怎么设计？我设计过一对，是在Primer5里search到的，100多bp，引物长度20bp 是在设置的条件下分数最高的一对引物，但是扩增的时候都扩增不出来，只有引物二聚体，求高手指点设计引物的要点，因为我感觉如果全按照那个设计引物规则的话，基本上没有引物可以用了我以前的引物参数是

下游引物

上游引物

[ Last edited by 380665135 on 2012-7-10 at 20:39 ]

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1楼 2012-07-10 18:28:56

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linxi8579

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★ ★ ★ ★
看天: 金币+4, 鼓励交流常来 2012-07-10 23:49:36

我感觉定量的引物尽管要求很高，一般的引物还是可以的。你可以用DNAMAN检测一下发夹结构，最好不要有。退火温度在60度左右就可以了，设计的时候都不是绝对的。实验不行就换就可以了，不过我设的引物按照我上面说的还没有不太好的呢。软件不行你可以手动的前后看看，有时候手动的设比软件好呢。

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2楼2012-07-10 22:58:10

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380665135

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2楼: Originally posted by linxi8579 at 2012-07-10 22:58:10
我感觉定量的引物尽管要求很高，一般的引物还是可以的。你可以用DNAMAN检测一下发夹结构，最好不要有。退火温度在60度左右就可以了，设计的时候都不是绝对的。实验不行就换就可以了，不过我设的引物按照我上面说的还 ...

恩谢谢啦你也是做的相对定量吗

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3楼2012-07-11 10:09:46

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