应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » qPCR引物设计
51/1返回列表
查看: 1790  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

380665135

新虫 (初入文坛)

[求助] qPCR引物设计

请问qPCR的引物怎么设计？ 我设计过一对， 是在Primer5里search到的，100多bp，引物长度20bp 是在设置的条件下分数最高的一对引物，但是扩增的时候都扩增不出来，只有引物二聚体，求高手指点设计引物的要点，因为我感觉如果全按照那个设计引物规则的话， 基本上没有引物可以用了我以前的引物参数是

下游引物



上游引物



[ Last edited by 380665135 on 2012-7-10 at 20:39 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-07-10 18:28:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jl860822

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
100多的片段不好扩增，你可以跑2%的凝胶看一下，我一直用Primer设计引物，还可以的，最近也要做QPCR，攒人品啊！
赞一下 回复此楼
9楼2012-07-13 15:18:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

linxi8579

铜虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
看天: 金币+4, 鼓励交流 常来 2012-07-10 23:49:36
我感觉定量的引物尽管要求很高，一般的引物还是可以的。你可以用DNAMAN检测一下发夹结构，最好不要有。退火温度在60度左右就可以了，设计的时候都不是绝对的。实验不行就换就可以了，不过我设的引物按照我上面说的还没有不太好的呢。软件不行你可以手动的前后看看，有时候手动的设比软件好呢。
赞一下 回复此楼
2楼2012-07-10 22:58:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

380665135

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by linxi8579 at 2012-07-10 22:58:10
我感觉定量的引物尽管要求很高，一般的引物还是可以的。你可以用DNAMAN检测一下发夹结构，最好不要有。退火温度在60度左右就可以了，设计的时候都不是绝对的。实验不行就换就可以了，不过我设的引物按照我上面说的还 ...

恩  谢谢啦  你也是做的相对定量吗
赞一下 回复此楼
3楼2012-07-11 10:09:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shenye.judy

木虫 (正式写手)
我们不用Primer5做qPCR引物设计，用oligo，Primer5似乎不行。
赞一下 回复此楼
4楼2012-07-11 12:31:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 关于豆爷回答的JTJC与%2F数量 +5 yang182083 2026-08-06 7/350 2026-08-08 18:29 by zhanghaozhu
[硕博家园] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 qTvzQBRAHjCi 2026-08-07 4/200 2026-08-08 17:19 by oEVWOejN9taj
[基金申请] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 5/250 2026-08-08 16:27 by oEVWOejN9taj
[基金申请] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 4/200 2026-08-08 16:19 by oEVWOejN9taj
[博后之家] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 4/200 2026-08-08 16:02 by oEVWOejN9taj
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 6/300 2026-08-08 15:07 by oEVWOejN9taj
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 6/300 2026-08-08 14:47 by oEVWOejN9taj
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 5/250 2026-08-08 14:27 by oEVWOejN9taj
[基金申请] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 4/200 2026-08-08 14:27 by oEVWOejN9taj
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 5/250 2026-08-08 14:22 by oEVWOejN9taj
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 KXLV3nuBVBY7 2026-08-07 6/300 2026-08-08 14:01 by oEVWOejN9taj
[基金申请] 关于代码变化问题，想知道的进来 +11 且听虎啸 2026-08-07 14/700 2026-08-08 12:50 by 布布和一二
[基金申请] 基金中了 +14 laoda193707 2026-08-06 14/700 2026-08-08 00:23 by 实验小白ha
[基金申请] 固定端突然变了，今天 +6 archvillain 2026-08-06 10/500 2026-08-07 16:03 by 医学老男孩
[基金申请] 听说今天filecode变了 +24 布布和一二 2026-08-06 47/2350 2026-08-07 16:02 by zhiyanjiang
[基金申请] 大家散了吧，后缀研究没有意义，别浪费时间了，过好目前的每一天，不要焦虑 +5 Tide man 2026-08-06 7/350 2026-08-07 13:11 by 医学老男孩
[基金申请] filecode +14 等待解的谜 2026-08-06 19/950 2026-08-07 12:20 by wlwhappy
[基金申请] 求各位大神看下 100+6 hpkpkpkp 2026-08-05 33/1650 2026-08-06 14:49 by zhiyanjiang
[基金申请] 纯娱乐，不喜欢勿喷 +7 Tide man 2026-08-04 10/500 2026-08-04 15:10 by loufangrui
[基金申请] 什么时候能放榜呀？ +3 Jacob678 2026-08-03 3/150 2026-08-03 16:14 by gltch
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭