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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » qPCR引物设计
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380665135

新虫 (初入文坛)

[求助] qPCR引物设计

请问qPCR的引物怎么设计？ 我设计过一对， 是在Primer5里search到的，100多bp，引物长度20bp 是在设置的条件下分数最高的一对引物，但是扩增的时候都扩增不出来，只有引物二聚体，求高手指点设计引物的要点，因为我感觉如果全按照那个设计引物规则的话， 基本上没有引物可以用了我以前的引物参数是

下游引物



上游引物



[ Last edited by 380665135 on 2012-7-10 at 20:39 ]
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1楼 2012-07-10 18:28:56
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jl860822

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
100多的片段不好扩增，你可以跑2%的凝胶看一下，我一直用Primer设计引物，还可以的，最近也要做QPCR，攒人品啊！
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9楼2012-07-13 15:18:21
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linxi8579

铜虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
看天: 金币+4, 鼓励交流 常来 2012-07-10 23:49:36
我感觉定量的引物尽管要求很高，一般的引物还是可以的。你可以用DNAMAN检测一下发夹结构，最好不要有。退火温度在60度左右就可以了，设计的时候都不是绝对的。实验不行就换就可以了，不过我设的引物按照我上面说的还没有不太好的呢。软件不行你可以手动的前后看看，有时候手动的设比软件好呢。
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2楼2012-07-10 22:58:10
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380665135

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by linxi8579 at 2012-07-10 22:58:10
我感觉定量的引物尽管要求很高，一般的引物还是可以的。你可以用DNAMAN检测一下发夹结构，最好不要有。退火温度在60度左右就可以了，设计的时候都不是绝对的。实验不行就换就可以了，不过我设的引物按照我上面说的还 ...

恩  谢谢啦  你也是做的相对定量吗
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3楼2012-07-11 10:09:46
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shenye.judy

木虫 (正式写手)
我们不用Primer5做qPCR引物设计，用oligo，Primer5似乎不行。
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4楼2012-07-11 12:31:33
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