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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 各位兄弟姐妹们，请教下各位AFLP的相关问题，不甚感激
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caiyifan

金虫 (小有名气)

[求助] 各位兄弟姐妹们，请教下各位AFLP的相关问题，不甚感激

我想问的问题有以下几点：
1. AFLP的读带有什么规律？比如，是读哪个区间的呢？50bp-500bp, 100bp-700bp?有没有什么参考的标准？或者说有没有什么依据呢？

2. AFLP为什么要变性？这样岂不是让条带更多更杂吗？

3. 选择性扩增结束后，PCR产物加变性剂94℃变性5min，为什么PAGE胶里还要加尿素，是让DNA始终保持单链的状态吗？

4. 我在跑Marker的时候，发现Marker也有杂带，无法清楚的指示位置，我的Marker是没变性的，但有的老师说Marker也要变性，可是Marker变性的话岂不是就不能和说明书上对照统一啦？

暂时就想到以上4个问题，希望各位大牛不吝赐教啊！
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I can and I will
1楼 2012-07-10 12:42:05
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我不放弃00

新虫 (初入文坛)
如果第一天做的选扩，第二天跑胶的话，应该第一天变性还是第二天点样之前变性？
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5楼2013-10-10 15:38:53
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caiyifan

金虫 (小有名气)
都没人回复的？自己顶一下~
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I can and I will
2楼2012-07-18 13:53:06
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虫儿7893

银虫 (小有名气)
关注学习，顶一下
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3楼2012-08-02 14:16:54
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-08-02 15:44:35
1，看你设计引物时目标片段的大小。
2，变性后消除高级结果的影响使结果更加准确，这是为什么在点样前要先将样品和MARKER变性的原因。
3，尿素是变性剂，你的理解是对的，保持单链状态。预电泳也是这个目的，使胶中的单晶跑出去，再有就是使胶一直在37-43度左右避免电泳过程中DNA复性。
4，MARKER是必须变性的，否则无法确定你的目标片段大小，否则，样品变性，MARKER不变性，没有可比性。
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4楼2012-08-02 15:00:45
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