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caiyifan

金虫 (小有名气)

[求助] 各位兄弟姐妹们,请教下各位AFLP的相关问题,不甚感激

我想问的问题有以下几点:
1. AFLP的读带有什么规律?比如,是读哪个区间的呢?50bp-500bp, 100bp-700bp?有没有什么参考的标准?或者说有没有什么依据呢?

2. AFLP为什么要变性?这样岂不是让条带更多更杂吗?

3. 选择性扩增结束后,PCR产物加变性剂94℃变性5min,为什么PAGE胶里还要加尿素,是让DNA始终保持单链的状态吗?

4. 我在跑Marker的时候,发现Marker也有杂带,无法清楚的指示位置,我的Marker是没变性的,但有的老师说Marker也要变性,可是Marker变性的话岂不是就不能和说明书上对照统一啦?

暂时就想到以上4个问题,希望各位大牛不吝赐教啊!
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I can and I will
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caiyifan

金虫 (小有名气)

都没人回复的?自己顶一下~
I can and I will
2楼2012-07-18 13:53:06
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虫儿7893

银虫 (小有名气)

关注学习,顶一下
3楼2012-08-02 14:16:54
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-08-02 15:44:35
1,看你设计引物时目标片段的大小。
2,变性后消除高级结果的影响使结果更加准确,这是为什么在点样前要先将样品和MARKER变性的原因。
3,尿素是变性剂,你的理解是对的,保持单链状态。预电泳也是这个目的,使胶中的单晶跑出去,再有就是使胶一直在37-43度左右避免电泳过程中DNA复性。
4,MARKER是必须变性的,否则无法确定你的目标片段大小,否则,样品变性,MARKER不变性,没有可比性。
4楼2012-08-02 15:00:45
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我不放弃00

新虫 (初入文坛)

如果第一天做的选扩,第二天跑胶的话,应该第一天变性还是第二天点样之前变性?
5楼2013-10-10 15:38:53
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