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war3one金虫 (著名写手)
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[求助]
构建质粒的问题
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我现在有个整合载体，有一个质粒，我想把整合载体里边的一个基因替换成质粒里边的营养缺陷性基因，请问试验如何设计？ 谢谢各位的帮助了 |
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 【分子生物】EPI帖 | 核酸与基因生物学 |
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tianyinghu
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【答案】应助回帖
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小丹木木: 金币+3, MolEPI+1, 鼓励积极解决问题 2012-07-04 13:53:01
war3one: 金币+15, ★★★★★最佳答案, 谢谢，但是请问下如何突变成2个酶切位点呢？ 2012-07-05 10:24:16
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方法很多： 介绍一种比较方便的方法吧，我目前就把你这2个基因编个号吧： 整合载体里边的一个基因：A,营养缺陷性基因:B 估计A基因2端没有酶切位点才犯愁的，如果有酶切位点的话那就简单多了，直接把B基因PCR酶切连接就好了，那怕这酶切位点不是直接跟在A的都好办的，只有把多余的序列设计到引物上就好了，当然比较头疼的是A的2端没有酶切位点。遇到这种情况也分2种比较常用的方法，如果你手里有Infusion酶的话，那就好办多了，设计2对引物，直接把整合载体P出来，接头设计20个只有的B基因，同样的B基因的引物加整合载体接头序列，如果你没有这个酶的话，你可以设计2个酶切位点，把这个A基因给突变掉，突变成2个酶切位点就可以了，然后正常的PCR酶切连接。 |
2楼2012-07-04 12:26:08
tianyinghu
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3楼2012-07-09 10:09:54