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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 发酵罐放大培养时，为何延迟期会很长
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chenweilala

金虫 (小有名气)

[求助] 发酵罐放大培养时，为何延迟期会很长

本人现在在做真菌发酵放大的中试试验，从摇瓶到100L发酵罐，先前在摇床培养时，发酵周期一般为5-6天，但是，现在在100L罐子上的发酵周期必须在8天左右才能达到摇瓶的水平，敢问那位大神可以为小弟传点经验？在转速、温度、溶氧方面给点提示
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1楼2012-07-02 17:29:22
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liurechen

银虫 (小有名气)
根据经验来看，你应该比较一下摇瓶培养基和小罐培养基灭菌时间长短有没有明显不同，培养体积越大升温和降温过程越长，对培养基营养成分的破坏越厉害，生产上也会经常遇到相同的问题。试试加大接种量，同时做一下糖分分析和氨基氮的分析，同时灭菌后培养基pH有可能会产生变化，这和摇瓶的情况也不一样，需要注意一下这些细节。
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相争两蜗角，所得一牛毛。 且灭嗔中火，休磨笑里刀。
8楼2012-07-04 11:10:01
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wgy2007

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
chenweilala: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-07-03 10:01:27
1.接种量：接种量少了会导致延迟期长，加大接种量试一下，一般从种子罐接种到发酵罐接种量2-10％。
2.转速的控制：如果你培养的是霉菌的起始转速要低一些，一般在200-300rpm，溶氧低于你要控制的水平时再适当提高转速，现在的发酵罐可以做到转速与溶氧关联。
3.我做过一种蛋白酶的发酵，要求溶氧>=30％（注：接种前校正溶氧100％时通风比为1：1，转速500-600rpm，罐压按设定的即可，校正完溶氧后再把风量、转速降到起始的水平后接种）。
4.风量的控制，一般起始通风比为1：0.3，当提高转速不能满足溶氧要求时要适当提高通风量。
5.罐压的控制，一般为0.05-0.1Mpa。
仅供参考，主要还是要根据培养菌种的实际情况确定。
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2楼2012-07-03 09:37:56
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chenweilala

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wgy2007 at 2012-07-03 09:37:56
1.接种量：接种量少了会导致延迟期长，加大接种量试一下，一般从种子罐接种到发酵罐接种量2-10％。
2.转速的控制：如果你培养的是霉菌的起始转速要低一些，一般在200-300rpm，溶氧低于你要控制的水平时再适当提高转 ...

敢问大仙，您所说的发酵前溶氧校正100%的措施是从哪得来的，我现在灭完菌后，溶氧100%的标定都是在发酵所需的温度、转速、通气量时进行的（发酵罐使用手册上也是明文规定的）？
还有，那个通风比1:1,1:0.3是什么意思？
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3楼2012-07-03 10:07:17
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xiaoqing518

木虫 (小有名气)
首先确定一下接种量，接种量太少会导致迟滞期延长，大罐发酵的接种量一般比较大，多的可以达到20%
其次，是不是转速太高剪切力太大，影响菌体生长。
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4楼2012-07-03 11:06:50
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wgy2007

木虫 (小有名气)
溶氧100％的校正根据别人提供的资料得来的，我做过的细菌、酵母、霉菌的发酵溶氧的校正技术提供方都是这么给的，原因没有做过研究，根据实际情况定，不一定按着我说的做。
通风比：如果发酵培养基的体积为60L，通风比1：1，通入无菌空气的流量为60L/min，通风比1：0.3通入空气的量为18L/min，具体的空气流量还要根据进空气的压力和罐压进行计算，这个应该都会算的。
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5楼2012-07-03 15:29:42
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chenweilala

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by xiaoqing518 at 2012-07-03 11:06:50
首先确定一下接种量，接种量太少会导致迟滞期延长，大罐发酵的接种量一般比较大，多的可以达到20%
其次，是不是转速太高剪切力太大，影响菌体生长。

万分感谢
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6楼2012-07-03 18:59:08
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chenweilala

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by wgy2007 at 2012-07-03 15:29:42
溶氧100％的校正根据别人提供的资料得来的，我做过的细菌、酵母、霉菌的发酵溶氧的校正技术提供方都是这么给的，原因没有做过研究，根据实际情况定，不一定按着我说的做。
通风比：如果发酵培养基的体积为60L，通风 ...

感谢解答！
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7楼2012-07-03 19:56:10
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chenweilala

金虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by liurechen at 2012-07-04 11:10:01
根据经验来看，你应该比较一下摇瓶培养基和小罐培养基灭菌时间长短有没有明显不同，培养体积越大升温和降温过程越长，对培养基营养成分的破坏越厉害，生产上也会经常遇到相同的问题。试试加大接种量，同时做一下糖分 ...

是的，就是不知道灭菌后，是不是培养基成分受到蒸汽的破坏从而使菌体不可利用。我的pH在初始时是5.5.灭菌后为5左右，影响不大！
多谢提示，感谢万分！
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9楼2012-07-04 12:09:29
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liurechen

银虫 (小有名气)
经验上来看，一般比较粗壮的真菌比如黑根霉对搅拌剪切更为敏感，因为它在发酵过程中一般是絮状悬浮，很容易打碎后造成自溶，影响生产，而比较细的菌丝对搅拌剪切不是太敏感，因为它们一般以菌丝球的状态存在，对溶氧更加敏感。如果存在上述问题试着改变一下搅拌桨的样式，比如由直叶涡轮式改为箭叶涡轮式搅拌桨。
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相争两蜗角，所得一牛毛。 且灭嗔中火，休磨笑里刀。
10楼2012-07-05 10:29:22
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