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rainbow8

新虫 (小有名气)

[求助] 酵母质粒转化的问题!急!!!大家请关注

           大家好,最近总是觉得质粒转化酵母的转化效率比较低,问一下大家:加入多少感受态和质粒? 有文献报道40ng感受态加小于100ng的质粒,也有文献报道65ng加小于1ug的质粒,还有文献报道加不超过2-3ug的质粒。我试过前两个,感觉都差不多,大家有没有做这方面转化效率高的参数,指导指导我,谢谢了!!!
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【分子生物】EPI帖

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学海无涯,回头是岸
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dafeizizhu

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励交流经验 2012-06-27 13:39:12
虽然电转是使用仪器,效果好一点。我觉得没有必要用电转,普通的冷激转化就行。以前我做转化,也是不出结果,都是细节上的问题。比如感受态细胞的好坏(购买的好点儿),冷激时间的把握.......正如上面老兄说的,细节决定着成败,重复一定有收获。
5楼2012-06-27 09:21:10
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小丹木木

荣誉版主 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你用什么转的?电转么?
线性化了么?
2楼2012-06-26 16:43:22
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rainbow8

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 小丹木木 at 2012-06-26 16:43:22
你用什么转的?电转么?
线性化了么?

是电转 线性化了
学海无涯,回头是岸
3楼2012-06-26 17:05:42
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post_ngao

木虫 (正式写手)

科研宅

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, MolEPI+1, 正解,这些都很重要 2012-06-27 07:59:18
虽然我的质粒大概在1ug左右,但是我觉得这些数据全都不重要。电转的成功与否完全取决于你对于操作的细节上的把握。比如电转杯的前处理,比如冰浴,比如电转电压,比如电转之后菌液的处理。这是我博士期间最大、最真实的感受。我到最后根本不看多少菌多少质粒,但是做三次肯定可以出来两次,只是单克隆多少的问题。电转绝对是细节决定成败。
天命所归,各安其位
4楼2012-06-26 22:33:16
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