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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 酵母质粒转化的问题！急！！！大家请关注
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rainbow8

新虫 (小有名气)

[求助] 酵母质粒转化的问题！急！！！大家请关注

           大家好，最近总是觉得质粒转化酵母的转化效率比较低，问一下大家：加入多少感受态和质粒？ 有文献报道40ng感受态加小于100ng的质粒，也有文献报道65ng加小于1ug的质粒，还有文献报道加不超过2-3ug的质粒。我试过前两个，感觉都差不多，大家有没有做这方面转化效率高的参数，指导指导我，谢谢了！！！
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学海无涯，回头是岸
1楼 2012-06-26 15:12:23
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小丹木木

荣誉版主 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你用什么转的？电转么？
线性化了么？
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2楼2012-06-26 16:43:22
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rainbow8

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 小丹木木 at 2012-06-26 16:43:22
你用什么转的？电转么？
线性化了么？

是电转 线性化了
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学海无涯，回头是岸
3楼2012-06-26 17:05:42
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post_ngao

木虫 (正式写手)

科研宅

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, MolEPI+1, 正解，这些都很重要 2012-06-27 07:59:18
虽然我的质粒大概在1ug左右，但是我觉得这些数据全都不重要。电转的成功与否完全取决于你对于操作的细节上的把握。比如电转杯的前处理，比如冰浴，比如电转电压，比如电转之后菌液的处理。这是我博士期间最大、最真实的感受。我到最后根本不看多少菌多少质粒，但是做三次肯定可以出来两次，只是单克隆多少的问题。电转绝对是细节决定成败。
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天命所归，各安其位
4楼2012-06-26 22:33:16
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dafeizizhu

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励交流经验 2012-06-27 13:39:12
虽然电转是使用仪器，效果好一点。我觉得没有必要用电转，普通的冷激转化就行。以前我做转化，也是不出结果，都是细节上的问题。比如感受态细胞的好坏（购买的好点儿），冷激时间的把握.......正如上面老兄说的，细节决定着成败，重复一定有收获。
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5楼2012-06-27 09:21:10
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rainbow8

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by post_ngao at 2012-06-26 22:33:16
虽然我的质粒大概在1ug左右，但是我觉得这些数据全都不重要。电转的成功与否完全取决于你对于操作的细节上的把握。比如电转杯的前处理，比如冰浴，比如电转电压，比如电转之后菌液的处理。这是我博士期间最大、最真 ...

电转之后菌液你都是怎么处理的？谢谢
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学海无涯，回头是岸
6楼2012-06-27 19:19:34
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