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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 做GS115感受态最后一步－80保藏，是否需要加甘油？
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foxcl

铁虫 (正式写手)

[求助] 做GS115感受态最后一步－80保藏，是否需要加甘油？

按正常方法制做GS115酵母感觉态。

200mL最后加2mL的山梨醇，是否需要加50%甘油再－80度保藏？

因为做Jm109感受态的时候，最后一步我是加50ul的CaCl2和50ul的甘油（总共100ul），然后－80保藏。所以有此一问。

谢谢。
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1楼2012-06-23 00:22:17
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

molecula

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zhang8826857: 金币+2, 端午节快乐，欢迎来微生物板块交流^_^ 2012-06-23 16:41:12
foxcl: 金币+1, ★★★★★最佳答案, 想知道如果最后一步50ul的山梨醇+50ul的50%甘油，再冷冻是否可行？有什么影响？ 2012-06-23 16:53:07
我的建议是  把做好的感受态的EP管放在大的50ml离心管中
在50ml离心管中装入甘油
然后放入-80  这样的方法好处有两个
第一  缓慢降温，更有利于感受态的效率
第二  最大效率防治冰晶产生
即便是超低温停电除了故障
外围的甘油也有一个缓慢升温的过程
这个是实验室小技巧
呵呵~
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lvye3707
4楼2012-06-23 11:24:25
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普通回帖

灵响2010

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
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zhang8826857: 金币+1, 端午节快乐，欢迎来微生物板块交流^_^ 2012-06-23 16:40:57
foxcl: 金币+1, 可是很多时候都是做大批量再冷冻的啊。 2012-06-23 16:51:18
毕赤酵母感受态细胞，是现做现用的
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2楼2012-06-23 09:51:11
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青鸟7980

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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zhang8826857: 金币+1, 端午节快乐，欢迎来微生物板块交流^_^ 2012-06-23 16:41:03
foxcl: 金币+1, ★★★★★最佳答案, 对山梨醇特性不熟，所以最后还是加了一半的甘油。 2012-06-23 16:51:58
不加甘油
里面不是加了山梨醇吗
就这样放负80度冰箱里
可以用至少2个月
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3楼2012-06-23 10:09:09
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nemo88

禁虫 (小有名气)
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amisking: 金币+1, 鼓励发帖交流问题。 2012-06-23 22:06:06
foxcl: 金币+1, 谢谢。我摇瓶200mL做一次要2.5个小时，每次新鲜做会疯掉的。 2012-06-24 09:44:14
本帖内容被屏蔽
5楼2012-06-23 21:02:51
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foxcl

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by nemo88 at 2012-06-23 21:02:51
酵母我也是现做现用的 这个不是不建议冻存？
反正我是宁可花费上两天时间去制备新的，也不愿意用旧的没做出来等上一周没结果再回去找原因

那你是直接用试管小批量制作的吧？
不是用摇瓶摇的吧？

做完保存肯定可以，但是和新鲜做的效果差多少目前不太清楚。
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6楼2012-06-24 09:43:25
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nemo88

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
7楼2012-06-24 15:24:13
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毛桃就是我

银虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by molecula at 2012-06-23 11:24:25
我的建议是  把做好的感受态的EP管放在大的50ml离心管中
在50ml离心管中装入甘油
然后放入-80  这样的方法好处有两个
第一  缓慢降温，更有利于感受态的效率
第二  最大效率防治冰晶产生
即便是超低温停电除了 ...

这个方法好！
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木有签名呀！
8楼2012-06-25 10:54:59
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lihao1988903

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
最好感受态别放置太长时间，现做现用。
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9楼2012-06-25 11:00:22
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jinpeng_6118

木虫 (正式写手)
LZ，请问GS115菌株（或者SMD1168）能交换或者寄点给我吗，最近用km71在做，表达效果不怎么样，所以想要点菌株，谢谢
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人生百态原为海，看破红尘方为岸！
10楼2012-06-25 15:15:41
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