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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 毕赤酵母工程菌的保藏
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天马0825

银虫 (小有名气)

[求助] 毕赤酵母工程菌的保藏 已有1人参与

各位虫友，小女子刚开始做毕赤酵母重组菌的构建，筛选了一株表达量高的，而后用YPD斜面保藏，但是后来再做的时候，发现表达量急剧下降减少了约十倍，同样的培养方法。求解释。。。。我再怀疑是不是我的保藏有问题，应该拿MD斜面保藏么？还是什么？求大神指点？
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自信加努力成就人生
1楼 2013-11-17 20:28:05
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lvye3707

金虫 (正式写手)
你好，我刚开始做酵母表达，没有做遗传霉素筛选，挑阳性Gs115菌种后，在YPD培养基里摇菌，需要加G418抗生素么？
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2楼2013-11-18 08:53:01
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天马0825

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lvye3707 at 2013-11-18 08:53:01
你好，我刚开始做酵母表达，没有做遗传霉素筛选，挑阳性Gs115菌种后，在YPD培养基里摇菌，需要加G418抗生素么？

那得看你使用的什么载体和宿主吧。G418一般是用来筛选多拷贝的！
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自信加努力成就人生
3楼2013-11-18 09:57:18
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lvye3707

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 天马0825 at 2013-11-18 09:57:18
那得看你使用的什么载体和宿主吧。G418一般是用来筛选多拷贝的！...

谢谢了
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4楼2013-11-18 11:15:44
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肖颖2009

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
YPD斜面保藏菌种是短期保存菌种的方法，顶多就个把月的时间，看斜面有变干的迹象就应该重新穿刺保存，或者是用YDP的培养基摇混后用甘油管保存，甘油管保存的时间可以相对长一些。你可以尝试着把斜面的酵母菌重新活化（也就是重新划线）后再接种摇瓶。
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5楼2013-11-18 14:22:30
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天马0825

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 肖颖2009 at 2013-11-18 14:22:30
YPD斜面保藏菌种是短期保存菌种的方法，顶多就个把月的时间，看斜面有变干的迹象就应该重新穿刺保存，或者是用YDP的培养基摇混后用甘油管保存，甘油管保存的时间可以相对长一些。你可以尝试着把斜面的酵母菌重新活化 ...

谢谢！因为我的斜面也就只做了半个多月，进行的摇瓶。应该不至于退化吧，而且按理来讲酵母重组菌的稳定性能应该挺高的。我就一直很好奇，想想可能是染菌了，所以准备换用YNB培养！
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自信加努力成就人生
6楼2013-11-18 18:22:06
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lymic07

禁虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
7楼2013-12-31 18:13:16
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