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天马0825

银虫 (小有名气)

[求助] 毕赤酵母工程菌的保藏 已有1人参与

各位虫友,小女子刚开始做毕赤酵母重组菌的构建,筛选了一株表达量高的,而后用YPD斜面保藏,但是后来再做的时候,发现表达量急剧下降减少了约十倍,同样的培养方法。求解释。。。。我再怀疑是不是我的保藏有问题,应该拿MD斜面保藏么?还是什么?求大神指点?
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自信加努力成就人生
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lvye3707

金虫 (正式写手)

你好,我刚开始做酵母表达,没有做遗传霉素筛选,挑阳性Gs115菌种后,在YPD培养基里摇菌,需要加G418抗生素么?
2楼2013-11-18 08:53:01
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天马0825

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by lvye3707 at 2013-11-18 08:53:01
你好,我刚开始做酵母表达,没有做遗传霉素筛选,挑阳性Gs115菌种后,在YPD培养基里摇菌,需要加G418抗生素么?

那得看你使用的什么载体和宿主吧。G418一般是用来筛选多拷贝的!
自信加努力成就人生
3楼2013-11-18 09:57:18
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lvye3707

金虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 天马0825 at 2013-11-18 09:57:18
那得看你使用的什么载体和宿主吧。G418一般是用来筛选多拷贝的!...

谢谢了
4楼2013-11-18 11:15:44
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肖颖2009

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
YPD斜面保藏菌种是短期保存菌种的方法,顶多就个把月的时间,看斜面有变干的迹象就应该重新穿刺保存,或者是用YDP的培养基摇混后用甘油管保存,甘油管保存的时间可以相对长一些。你可以尝试着把斜面的酵母菌重新活化(也就是重新划线)后再接种摇瓶。
5楼2013-11-18 14:22:30
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天马0825

银虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 肖颖2009 at 2013-11-18 14:22:30
YPD斜面保藏菌种是短期保存菌种的方法,顶多就个把月的时间,看斜面有变干的迹象就应该重新穿刺保存,或者是用YDP的培养基摇混后用甘油管保存,甘油管保存的时间可以相对长一些。你可以尝试着把斜面的酵母菌重新活化 ...

谢谢!因为我的斜面也就只做了半个多月,进行的摇瓶。应该不至于退化吧,而且按理来讲酵母重组菌的稳定性能应该挺高的。我就一直很好奇,想想可能是染菌了,所以准备换用YNB培养!
自信加努力成就人生
6楼2013-11-18 18:22:06
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lymic07

禁虫 (初入文坛)

本帖内容被屏蔽

7楼2013-12-31 18:13:16
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