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huichong

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[交流] 怎么验证我转化成功呀已有15人参与

我的质粒连接后就做了转化到DH5a里，然后涂在lb+氨苄的板子上也长了菌，但是我做菌液pcr验证的时候一直p不出来。没有条带，引物特别亮，究竟我这是不是没有转化成功呀，按道理不是长菌了就是成功了吗。

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1楼 2012-06-11 13:38:16

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nemo88

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3楼2012-06-11 15:32:37

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黑手1989

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长出来不代表转化进去了重组质粒，转进去空质粒的菌也是可以长出来的吧

2楼2012-06-11 14:01:35

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jiangly

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你应该涂个空白对照，看看感受态有没有被污染或者平板的抗生素有没有失效。如果前两者没有问题，再做菌液PCR，还是你上述的结果的话，就是没有连接上，全是质粒自连了。

4楼2012-06-11 15:51:45

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flownaway

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连接的产物应该留一部分做酶切电泳验证的

5楼2012-06-11 16:12:59

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ivyvampire

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第一，连接后长的菌可能是空载的，第二，PCR条件不一样，也可能P不出结果
我们一般都是提质粒酶切验证的

6楼2012-06-11 16:55:18

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504775490

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PCR不一定准确，可以做个酶切，或者直接拿菌液去测序！

7楼2012-06-11 21:38:11

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wt3532

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引用回帖:

5楼: Originally posted by flownaway at 2012-06-11 16:12:59
连接的产物应该留一部分做酶切电泳验证的

这个真没听说过有这么做的

8楼2012-06-11 21:42:47

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jimjohntall

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实在不行，你就提个质粒，测序，应该是可以确定的

9楼2012-06-11 21:46:40

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ilxly

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菌落PCR不可靠建议双酶切然后送测序

10楼2012-06-11 23:30:03

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