应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 怎么验证我转化成功呀
172/2返回列表上一页12
查看: 2410  |  回复: 16
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

清心莲子

银虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+3, 鼓励交流经验 2012-06-14 13:35:00
我谈下我的血泪史，希望 对你有帮助。
1.连接问题。我是将我的目的基因从一个vector转到另一个vector.方法是用双酶切切下原质粒中的目的基因，跑胶严证后，胶回收。然后做ligation.
此时酶的活性切除率很重要。我的酶切率不高，因为连接好的质粒少。
2，转化后涂菌。我有空白组和质粒组。
2，验证，我小提质粒，做酶切确定和 测序。
幸好序列正确。酶切也正确。
赞一下 回复此楼
11楼2012-06-12 06:11:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kukusnoopy

银虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+3, 鼓励交流经验 2012-06-14 13:35:12
1.首先最可能的原因是质粒没有完全切开，不知道你是单酶切还是双酶切，单酶切的话质粒容易自连，双酶切的话建议不要使用通用酶切buffer和条件去切，用分步酶切切得效果会比较好。
2.连接时质粒和目的基因的比例是否合适？
3.通常转化后平板长出来的菌P不出来或者双酶切没有目的条带，就说明你转进去的不是重组质粒，而是空载体。最先考虑的是第一条，你的质粒切开了没有。
赞一下 回复此楼
12楼2012-06-12 13:13:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuer9809

至尊木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
挑的时候不久可以初步看出来了吗？转化成功的是白斑，没转进去的是蓝斑。不过有时候不明显那就把摇好的菌液提个质粒看呗。
赞一下 回复此楼
13楼2012-06-12 15:16:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mhmtf

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
提质粒，质粒PCR，酶切验证，送菌株测序~
赞一下 回复此楼
gdfh
14楼2012-06-12 21:04:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mamadexiao

木虫 (正式写手)
双酶切，送测
回复此楼
15楼2012-06-13 21:18:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huichong

铁虫 (初入文坛)
谢谢各位了。我再说一下我做的吧，我是把我的质粒a做pcr加了个平末端，再把载体b做pcr加了平末端，然后做连接，再转化。现在一直是转化失败，我真无语了
赞一下 回复此楼
16楼2012-06-27 23:37:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

陌笙石上菁

禁虫
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
本帖内容被屏蔽
17楼2022-01-10 11:37:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 huichong 的主题更新
172/2返回列表上一页12
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[教师之家] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +3 oepdf5z972 2026-06-20 3/150 2026-06-21 21:01 by zo4669e5n4
[基金申请] E0414, 我的本子有没有希望？ +7 布布和一二 2026-06-17 9/450 2026-06-21 19:29 by 布布和一二
[考研] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +3 9skg9htng1 2026-06-20 3/150 2026-06-21 19:18 by q1p9ixelzp
[教师之家] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +3 9skg9htng1 2026-06-20 3/150 2026-06-21 18:58 by q1p9ixelzp
[公派出国] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +3 9skg9htng1 2026-06-20 3/150 2026-06-21 18:00 by q1p9ixelzp
[考研] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +3 9skg9htng1 2026-06-20 4/200 2026-06-21 17:45 by q1p9ixelzp
[论文投稿] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +3 9skg9htng1 2026-06-20 3/150 2026-06-21 17:40 by q1p9ixelzp
[论文投稿] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +3 9skg9htng1 2026-06-20 3/150 2026-06-21 17:37 by q1p9ixelzp
[公派出国] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +4 vlfdw50o0u 2026-06-20 4/200 2026-06-21 17:25 by ky8v3skvft
[考博] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +4 vlfdw50o0u 2026-06-20 5/250 2026-06-21 17:20 by ky8v3skvft
[博后之家] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +4 vlfdw50o0u 2026-06-20 6/300 2026-06-21 17:05 by ky8v3skvft
[公派出国] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +4 vlfdw50o0u 2026-06-20 5/250 2026-06-21 17:00 by ky8v3skvft
[教师之家] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +5 vlfdw50o0u 2026-06-20 7/350 2026-06-21 16:57 by ky8v3skvft
[论文投稿] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +3 vlfdw50o0u 2026-06-20 5/250 2026-06-21 16:45 by ky8v3skvft
[教师之家] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +4 vlfdw50o0u 2026-06-20 7/350 2026-06-21 16:40 by ky8v3skvft
[论文投稿] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +4 vlfdw50o0u 2026-06-20 9/450 2026-06-21 16:37 by ky8v3skvft
[基金申请] 青A35岁以下通知答辩了吗 +3 暨阳一只柴 2026-06-17 3/150 2026-06-21 09:39 by kudofaye
[考博] 【全奖博士/科研助理/博后招生】新加坡南洋理工大学机械与航空航天学院 +3 robohaha 2026-06-15 4/200 2026-06-21 00:36 by lanbing1
[基金申请] 希望面上有个好结果 +7 碧水00 2026-06-16 7/350 2026-06-18 12:18 by wuke100666
[论文投稿] 三区计算机方向期刊推荐 +5 1457340941 2026-06-15 5/250 2026-06-17 13:16 by 会议编辑
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭