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huichong

铁虫 (初入文坛)

[交流] 怎么验证我转化成功呀 已有15人参与

我的质粒连接后就做了转化到DH5a里,然后涂在lb+氨苄的板子上也长了菌,但是我做菌液pcr验证的时候一直p不出来。没有条带,引物特别亮,究竟我这是不是没有转化成功呀,按道理不是长菌了就是成功了吗。
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kukusnoopy

银虫 (初入文坛)

★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
小丹木木: 金币+3, 鼓励交流经验 2012-06-14 13:35:12
1.首先最可能的原因是质粒没有完全切开,不知道你是单酶切还是双酶切,单酶切的话质粒容易自连,双酶切的话建议不要使用通用酶切buffer和条件去切,用分步酶切切得效果会比较好。
2.连接时质粒和目的基因的比例是否合适?
3.通常转化后平板长出来的菌P不出来或者双酶切没有目的条带,就说明你转进去的不是重组质粒,而是空载体。最先考虑的是第一条,你的质粒切开了没有。
12楼2012-06-12 13:13:58
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