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huichong

铁虫 (初入文坛)

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专业: 生物大分子结构与功能

[交流] 怎么验证我转化成功呀已有15人参与

我的质粒连接后就做了转化到DH5a里，然后涂在lb+氨苄的板子上也长了菌，但是我做菌液pcr验证的时候一直p不出来。没有条带，引物特别亮，究竟我这是不是没有转化成功呀，按道理不是长菌了就是成功了吗。

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1楼 2012-06-11 13:38:16

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

清心莲子

银虫 (小有名气)

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虫号: 1379164
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专业: 消化系统肿瘤

★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+3, 鼓励交流经验 2012-06-14 13:35:00

我谈下我的血泪史，希望对你有帮助。
1.连接问题。我是将我的目的基因从一个vector转到另一个vector.方法是用双酶切切下原质粒中的目的基因，跑胶严证后，胶回收。然后做ligation.
此时酶的活性切除率很重要。我的酶切率不高，因为连接好的质粒少。
2，转化后涂菌。我有空白组和质粒组。
2，验证，我小提质粒，做酶切确定和测序。
幸好序列正确。酶切也正确。