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huichong

铁虫 (初入文坛)

[交流] 怎么验证我转化成功呀 已有15人参与

我的质粒连接后就做了转化到DH5a里,然后涂在lb+氨苄的板子上也长了菌,但是我做菌液pcr验证的时候一直p不出来。没有条带,引物特别亮,究竟我这是不是没有转化成功呀,按道理不是长菌了就是成功了吗。
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ivyvampire

新虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
第一,连接后长的菌可能是空载的,第二,PCR条件不一样,也可能P不出结果
我们一般都是提质粒酶切验证的
6楼2012-06-11 16:55:18
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黑手1989

银虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
长出来不代表转化进去了重组质粒,转进去空质粒的菌也是可以长出来的吧
2楼2012-06-11 14:01:35
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nemo88

禁虫 (小有名气)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
amisking: 金币+1, 鼓励发帖交流问题。 2012-06-11 20:32:54
本帖内容被屏蔽

3楼2012-06-11 15:32:37
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jiangly

木虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
amisking: 金币+2, 鼓励发帖帮助解答问题。 2012-06-11 20:32:58
你应该涂个空白对照,看看感受态有没有被污染或者平板的抗生素有没有失效。如果前两者没有问题,再做菌液PCR,还是你上述的结果的话,就是没有连接上,全是质粒自连了。
4楼2012-06-11 15:51:45
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